1樓：愛小腿子
實驗結果不能肯定的說明結果是成功的，做實驗的陰性對照也很重要，陰性對照必須做出陰性結果。如樓下的網友所說，可能是你的感受態菌被質粒汙染了。現在我回答一下你的 追問吧：
「未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出單菌落」，那麼這個長出的單菌落你有沒有做菌落pcr的鑑定？如果你沒有做菌落pcr的鑑定，還有一種可能就是你的板子上的抗生素濃度不夠，導致長出了菌，這個菌到底含不含有你的目的質粒，要做pcr鑑定，不要光看菌落長出與否。建議你把板子的抗生素濃度提高，同時看看未轉化質粒的感受態細胞在同樣的lb上塗板也長出的單菌落的pcr鑑定結果，從而判斷是否僅僅是感受態被質粒汙染了
為什麼我pcr之後轉化塗板長不出菌
2樓：萌萌趙穎兒
菌液太多，沒有吹乾或者培養基裡的水分倒回了板子上；感受態od太高，細菌老化；感受態有雜菌汙染；抗生素失效或濃度太低；轉化的質粒加多了~~~。
pcr產物轉化，搖菌1個小時嗎
3樓：夢裡浪裡
菌液pcr有風險，因為pcr是有一個級聯放大的效應在裡面，只要在菌液中沾了一點轉化時用的核酸片段，就有可能會擴增出來。但是送去測序的時候，很可能是假陽性，沒有連入任何片段（以前我們就碰到過這種情況，而且還是通過藍白斑篩選的）。如果實在沒有iptg和x-gal，也最好能先挑幾個單菌落去做菌落pcr，從中選取陽性的菌落去做液體搖菌，提質粒，找一個目標判斷上有的酶做一個單切，同時用自連的空載作為對照，看是否能夠切開。
如果菌體克隆切開了，空載切不開，才能說明找到了陽性克隆。送去測序才比較可靠。否則直接送去測序，很可能全是空載，白白耽誤時間。
為了節省時間，也可以先送去測序，等待測序的過程中，進行酶切驗證，對了更好，不對趕緊找其他的菌去送樣。
感受態可以再擴增用來製備感受態嗎
方法一 細菌轉化的方法多以mendel和higa 1970 的發現為基礎，其基本方法是用冰預冷的cacl2或多種2價陽離子等處理細菌，使之進入感受態得以轉化。用cacl2製備新鮮或冷凍的大腸桿菌感受態細胞，常用於成批製備感受態細菌。感受態細胞的製備和轉化中 為什麼要加兩次cacl2？cacl2為什麼...
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化方法
原因 目的基因匯入植物細胞時，由於沒有經過鈣離子處理沒有變成感受態細胞，細胞的通透性小，目的基因難以進入細胞。感受態細胞主要原理 1 通過處理使細胞的通透性變大。2 使得細胞膜表面出現一些孔洞，便於外源基因或載體進入感受態細胞。3 由於細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復。擴充套件資料 氯化鈣...
CaCl2製備感受態細胞轉化DNA時,低溫的目的是什麼 熱休
冰浴過程中，原來加在溶液中的鈣離子和細菌細胞膜結合，在低溫下形成液晶結構，這樣，在42度熱激下，這種液晶結構收縮，將細胞膜扯開孔道，使dna進入細菌細胞中。這就是原理。在0 4 cacl2低滲溶液中，細胞膨脹成球狀，轉化混合物中的dna形成抗dna酶的羥基 鈣磷酸複合物黏附於細胞表面，較低的溫度也降...