瓊脂糖電泳有何優缺點

2021-05-20 00:34:11 字數 758 閱讀 3821

1樓:手機使用者

瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。

瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的dn**段,其解析度雖比聚丙烯醯胺凝膠低,但它製備容易,分離範圍廣,尤其適於分離大片段dna。普通瓊脂糖凝膠分離dna的範圍為0.2-20kb,利用脈衝電泳,可分離高達10^7bp的dn**段。

瓊脂糖凝膠的特點

天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約佔80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構成的中性物質,不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由於這些基團帶有電荷,在電場作用下能產生較強的電滲現象,加之硫酸根可與某些蛋白質作用而影響電泳速度及分離效果。因此,目前多用瓊脂糖為電泳支援物進行平板電泳,其優點如下。

(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進行電泳。

(2)瓊脂糖凝膠結構均勻,含水量大(約佔98%~99%),近似自由電泳,樣品擴散較自由電流,對樣品吸附極微,因此電泳圖譜清晰,解析度高,重複性好。

(3)瓊脂糖透明無紫外吸收,電泳過程和結果可直接用紫外光燈檢測及定量測定。

(4)電泳後區帶易染色,樣品極易洗脫,便於定量測定。製成幹膜可長期儲存。

目前,常用瓊脂糖作為電泳支援物,分離蛋白質和同工酶。將瓊脂糖電泳與免疫化學相結合,發展成免疫電泳技術,能鑑別其他方法不能鑑別的複雜體系,由於建立了超微量技術,0.1ug蛋白質就可檢出。

瓊脂糖凝膠電泳常見問題有哪些

用瓊脂或瓊脂糖作支援介質的一種電泳方法。對於分子量較大的樣品,如大分子核酸 病毒等,一般可採用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳常見為題都有哪些?dna帶模糊 dna降解 瓊脂糖凝膠電泳試驗中要避免核酸酶汙染 電泳緩衝液陳舊 電泳緩衝液多系使用後,離子強度降解,ph值上升,緩衝能力減弱...

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