1樓:穎子
用葉綠體色素提取色素並測定葉綠素的含量。
利用葉綠體色素能溶於有機溶劑的特性,可用 95%乙醇提慎衝巖取。 分離色素的方法有多種,如紙層析、柱層析等。紙層析是其中最簡單的一種。
當溶劑不斷地從層析濾紙上流過時,由於混合色素中各種成分在兩相,即流動相和固定相。間具有不同的分配係數,它們的移動速度不同,使樣品中的各種成分得到分離。強光可以破壞離體的葉綠素,因為植物體內本來有還原酶,可寬御以破壞光產生的強氧化物質。
理化性質:
這二大類四種色素都不溶於水,而溶於有機溶劑,如乙醇、丙酮等。通常用80%的丙酮或丙酮:乙醇:水的混合液來提取葉綠素。
按化學性質來說,葉綠素是葉綠酸的酯,在鹼的作用下,可使其酯鍵發生皂化作用,生成葉綠酸的鹽,能溶於水,但由於它保留有mg核的結構,仍保持原來的綠色。
而類胡蘿蔔素中,胡蘿蔔素是不飽和的碳氫化合物,β—胡蘿蔔素水解可生成2分子維生素a,葉黃素是由判衫胡蘿蔔素衍生的二元醇,不能與鹼發生皂化反應,根據這一點,可以將葉綠素和類胡蘿蔔素分開。
葉綠素含量的測定
2樓:星星和葉子的柔
葉綠素含量的測定方法如下:
葉綠素含量跟光合作用速率、植物營養狀況等指標密切相關,通常,我們會通過對葉綠素含量的測定,來了解植物的生長狀況。一般,植物葉綠素含量測定有三種:分光光度法,活體葉綠素儀法和光聲光譜法。
其中分光光度法是應用最廣泛的葉綠素含量測定方法。
葉綠素含量的計算:
葉綠素含量測定首先得提取葉綠體色素,葉綠體 色素中含有葉綠體a,葉綠體b,胡蘿蔔素和葉黃素。在提取葉綠體色素時,我們使用不同的試劑,如丙酮,乙醇等有機物。
當試劑不同時,所得到的結果也會不 同。上圖中我們使用四種不同的溶劑,進行葉綠體色素的提取。圖中通過對四種溶劑在600nm-700nm波長間的吸光量進行比較,從而計算葉綠素含量,而 從圖中,我們可以大致得到,這四種葉綠素提取液的光吸收性質基本相同。
利用分光光度法測定葉綠素含量是依據lambert-beer定律,數學表示式為a=kbc。其中,a為吸光度;k為吸光系滾轎數;b為溶液的厚度;c為溶液濃度禪缺。
葉綠素a,b的丙酮溶液在可見光範圍內的最大吸收峰分別在663nm和645nm處。葉綠素a和b在663nm處的吸光係數分別為和;在645nm處的吸光係數分別為和。根據lambert-beer定律,我們可以列出方程:
d663 =
d645 =
根據以上方程組,可以求得:
ca = –
cb = –
然後我們又可求得葉綠素總量ct =(d652 × 1000)/
95% 丙酮2乙醇(勻漿)的提取效果最佳,因此,我們在進行葉綠素含量測定的時候,可以考慮運用95% 丙酮2乙醇(勻漿)作為提取液。
目前已經發明瞭比較方便的用於測量葉綠素賀備辯含量的儀器—葉綠素含量測定儀,它是通過測量植物的葉綠素相對含量來了解土壤的效能指標和植物的硝基需求量,並瞭解植物的生長狀況。
葉綠素含量的測定及計算結果
3樓:網友
葉綠素含量的測定及計算結果如下:
葉綠素a、b在紅光區的最大吸收峰分別為663nm和645nm,可用以下聯立方程求葉綠素溶液中的葉綠素a、b的含量。
d663=d645=
式中d663、d664分別為波長663nm和645nm處測定葉綠素溶液的光密度;ca、cb分別為葉綠素a、b的濃度(g/l.27分別為葉綠素a、b在波長663nm時的比吸收係數.6分別為葉綠素a、b在波長645nm時的比吸收係數。
解聯立方程(1)、(2)則得:
ca=cb=如把葉綠素含量單位由g/l改為mg/l,(3)、(4)式則可改寫為:
ca(mg/l)=
cb(mg/l)=
葉綠素總量c(mg/l)=cacb=
葉綠素總量也可根據下式求導。
d652=652nm為葉綠素a與b在紅光區吸收光譜曲線的交叉點(等吸收點),為葉綠素a、b在波長652nm處的吸收係數。
dc=d652/
dc=d652×1000/
因此,利用(5)、(6)式可分別計算葉綠素a與b含量,利用(7)式或(9)式可計算葉綠素總量。
葉綠體色素的提取液中除含有葉綠素a與b外,還含有葉黃素和胡蘿蔔素,因為葉黃素和胡蘿蔔素的吸收光譜均在藍光區,故不會干擾葉綠素含量在紅光區的分光光度法測定。
用什麼提取色素並測定葉綠素含量
4樓:小陽論數碼
一般用95%的酒精和80%丙酮提取,或用酒精、丙酮和水的混合液提取色素並測定葉綠素李腔凳含量。
一、測定原理。
根據葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收,利用分光光度計在某一特定波長測定其吸光度,即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度a與其中溶質濃度c和液層厚度l成正比,即a=αcl式中:α比例常數。
二、材料、儀器裝置及試劑。
1、材料:新鮮(或烘乾)的植物葉片。
2、儀器裝置:分光光度計;電子頂載天平(感量;研缽;棕色容量瓶;小漏斗;定量濾紙;吸水紙;擦境紙;滴管。
3、試劑:96%乙哪旅醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸鈣粉。
三、實驗步驟。
1、取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或乾材料,擦淨組織表面汙物,剪碎(去掉中脈),混勻。
2、稱取剪碎的新鮮樣品,共3份,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3ml95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10ml,繼續研磨至組織變白。靜置3~5min。
3、取濾紙1張,置漏斗中,用乙醇溼潤,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數次,最後連同殘渣一起倒入漏斗中。
4、用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直圓大至濾紙和殘渣中無綠色為止。最後用乙醇定容至25ml,搖勻。
5、把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內。以95%乙醇為空白,在波長665nm、649nm下測定吸光度。
葉綠素含量的測定
5樓:最美不過初遇
葉綠素含量的測定,葉綠素的含量與植物光合作用及氮素營養有密切的關係,在科學施肥、育種 及植物病理研究上常有測定的需要。
一、目的 掌握葉綠素a、b 含量測定的基本原理和方法。 葉綠素含量的測定葉綠素的含量與植物光合作用及氮素營養有密切的關係,在科學施肥、育種 及植物病理研究上常有測定的需要。
二、葉綠素是植物進行光合作用的主要色素,是一類含脂的色素家族,位於類囊體膜。葉綠素吸收大部分的紅光和紫光,但反射綠光,所以葉綠素呈現綠色,它在光合作用的光吸收中起核心作用。
葉綠素為鎂卟啉化合物,包括葉綠素a、b、c、d、f以及原葉綠素和細菌葉綠素等。葉綠素不很穩定,光、酸、鹼、氧、氧化劑等都會使其分解。酸性條件下,葉綠素分子很容易失去卟啉環中的鎂成為去鎂葉綠素。
葉綠素有造血、提供維生素、解毒、抗病等多種用途。
為什麼用乙醇提取葉綠素用丙酮分離葉綠素
都是可以提取的。因為都是有機溶劑,我們知道有機物還有溴碘之間是互溶的,所以可以把葉綠素提取出來。葉綠體中的色素都能夠溶解於有機溶劑丙酮中,所以,可以用丙酮提取葉綠體中的色素。層析液 石油醚 是一種脂溶性很強的有機溶劑。作用 溶解並分離色素 把葉綠體中的色素溶解到丙酮裡,這個液體就叫濾液。葉綠體中含有...
如果用95 的乙醇提取葉綠素,要注意什麼問題
使用 乙醇提取葉綠素時,需要注意以下芹段賀問題 .應使用新鮮植物的葉片,以保證葉綠素含量和活性的最佳。.洗淨並擦乾的葉片可以剪碎,以便於提取。.在研缽中加入少量石英砂和碳酸鈣,再加入 ml 乙醇,研磨至糊狀。.繼續加入 ml 乙醇,離心min。.提取上清液並過濾到三角瓶中,再用燃者ml 乙醇沖洗殘渣...
葉綠素提取試驗中,丙酮的作用是什麼?酒精呢?色素的提取和分離
兩種溶液都是能夠溶解葉綠體色素的有機溶劑 用酒精時應向色拳提取液中加少量無水na2co3!可以使葉綠素溶解在裡面 由於葉綠素和類胡蘿蔔素都是有機物,而層析液是有機溶劑,所以可以溶解這些色素 葉綠素中色素提取的試驗中,丙酮的作用是什麼?葉綠素中色素提取的試驗中,丙酮的作用是萃取葉綠素。1 葉綠素中色素...