舉例說明某一種色譜層析分離法的應用,並詳細闡述分離過程

2025-06-21 07:45:25 字數 5548 閱讀 3087

1樓:蘇鑫鑫

親和色譜法。

在生物體內,許多大分子具有與某些相對應的專一分子可逆結合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、激素和受體、rna和其互補的dna等,都具有這種特性。生物分子之間這種特異的結合能力稱為親和力,根據生物分子間親和吸附和解離的原理,建立起來的色譜法稱親和色譜法。

親和色譜中兩個進行專一結合的分子互稱對方為配基。如抗原和抗體,抗原可認為是抗體的配基,反之抗體也可認為是抗原的配基。將乙個水溶性配基在不傷害其生物學功能的情況下與水不溶性載體結合稱為配基的固相化。

親和色譜法的基本過程是:

1.配基固相化。將與純化物件有專一結合作用的物質,連線在水不溶性載體上,製成親和吸附劑後裝柱(稱親和住)。

2.親和吸附。將含有純化物件的混合物通過親和柱,純化物件吸附在柱上,其他物質流出色譜柱。

3.解吸附。用某種緩衝液或溶耐弊銷液通過親和柱,把吸附在親和卜圓柱上的欲純化物質洗脫出昌游來。

親和色譜具有高選擇、高活性**率和高純度等特點,已成為生物工程中分離純化最有效的技術之一,是生物化工研究的重要方向。

2樓:孫明豔and兔子

我一搜問題 居然有一模一樣的 再一看 是我們張學姐提的 我了個去。

簡述色譜分離過程

3樓:機器

色譜分離基於各組分在兩相之間平衡分配的差異。

以吸附色譜為例。

吸附→ 解吸→再吸附 →再解吸 →反覆多次洗脫→被洞螞測組分分配係數不同→ 差速遷移 → 分離。

分配係數的微小差培顫塌異→吸附能力的微小差異微小差異積累→較大差配圓異→吸附能力弱的組分先流出;吸附能力強的組分後流出。

製備薄層色譜法的優缺點是什麼 ?簡述製備薄層分離的過程,找出每一步驟的關鍵操作。

4樓:網友

**:《分析測試百科網》

ptlc的應用體會。

ptlc也就是我們通常所說的製備薄層板,對於一些在tlc小板上分離度比較好的化合物,我們可以考慮用製備薄層來進行分離,進而得到單品。這個也算是實驗室一種很常規的一種分離方法,大家應該有所體會。

下面就是我做ptlc的過程:

第一,鋪板:稱取30克的薄層矽膠,加入3倍量的千分之五的cmc-na沿著乙個方向攪勻,攪拌的時間大概在25分鐘左右,當然個體存在差異,力氣大的可能15分鐘也可以攪的很勻。放在窗臺晾乾24小時也就可以使用了。

第二,洗板:在點樣之前,先用純甲醇把板洗一下,因為矽膠板中有一些雜質本身會影響我們的樣品,一般會看到友一層淡黃色的帶被推到最前沿,那就是雜質了,這樣洗板的目的也就達到了,將洗好的板拿出來放在通風櫥吹乾待用。

第三,點樣:這是關鍵的一步,若是點樣點的不好,會非常影響我們製備薄層板的效果,嚴重的甚至達不到分離的目的。一般我是將樣品溶液10-50mg(點樣量不可過多,超載的話在的板上出現鋸齒狀,點也不可砸壞,會大大的影響效果)線性滴加於矽膠板上,儘量不要用水來溶解樣品,否則會擴散的很嚴重,效果不好。

第四,飽和:先把劑(劑最好不要用水,甲醇等極性打的劑,可能會使矽膠,cmc-na等一起洗下來)(20ml)左右放在槽一側,把ptlc板放在另一側30分鐘進行預飽和,之後將劑傾斜倒入另一側進行,這樣可以避免邊緣效應,目的還是乙個,為了使我們的分離效更好。

第五,刮板:將上面後的板拿出吹乾以後,確定自己要刮的範圍,用鉛筆畫上即可,接著用刀片將所畫的範圍刮下來即可。將掛下的矽膠用小柱裝上,用溶劑將其洗出即可,充的話儘量充乾淨,不然浪費的都是自己的樣品啊。

我在製備tlc的時候就是上面的步驟了,這其中可能有一些我想的還不周到的地方,希望大家海涵!

優缺點要有對比才好說吧,建議您可以到行業內專業的**進行交流學習!

分析測試百科網這塊做得不錯,氣相、液相、質譜、光譜、藥物分析、化學分析、食品分析。這方面的專家比較多,基本上問題都能得到解答,有問題可去那提問,**搜下就有。

色譜的分離度是怎麼回事,什麼因素會影響他,請舉例說明,謝謝了!

5樓:網友

首先你先確定你用的什麼色譜,是氣相還是液相。液相他已經解釋的很清楚了。氣相影響因素有載氣型別,載氣流速,柱溫,色譜柱型別(毛細還要涉及到分流比)。

來決定。比如白酒,就要用白酒分析專用色譜柱 柱流速為2ml/min 分流比分30:1柱溫80°就可以達到理想的分離度(不絕對僅供參考)

6樓:網友

此答案相當複雜,色譜本身就有很多分類,氣相、液相、離子色譜、薄層層析各有不同的影響因素,若想詳細瞭解,可登入儀器資訊網論壇檢視,什麼都有了。

色譜法分離是根據什麼原理進行的

7樓:網友

色譜分離法;chromatographic separation在工業上應用色譜分析原理分離性質近似組分的方法。使溶液分批通過垂直的填充吸附劑固定床,將各種組分分離精製。色譜柱內的填充吸附劑是多孔的惰性固體,用非揮發性的惰性液體塗漬。

被分離溶液的溶質與惰性液體有大小不同的溶解度。如果被吸附的物質是氣體,發生「吸收」現象。如果被吸附的物質是液體,發生「萃取」現象。

分離係數取數聚決於分配係數的大小。常用的操作法有:(1)迎頭分離法,當溶液連續通入吸附固定床時,溶液中諸組分因吸附能力大小不同,可順序地由固定床另一端排出;(2)沖洗分離法,在送入溶液的同時,通入不被吸附的載體,可順序地被吸附和解吸,然後以一定的間隔隔離開;(3)頂替分離法,在載氣中加入吸附能力最強的組分,使依次頂替被吸附的諸組分。

色譜分離除已在分析技術中廣泛應用外,也已在化工、冶金和環保等領域中加以利用。

色譜的分離原理都是利用待測物質在流動相和固定相兩相間的分配係數的不同而實現分離。

對於氣液色譜來說,分離原理是利用不同物質在流動相以及固定液中的分配係數(溶解度)不同而實現分離;當流動相流動時,流動相是溶解性相近的惰性氣體,而固定相的溶解性隨固定液的不同而不同,所以分配係數主要決定於固定液的性質。

液相色譜法有幾種型別?在這些型別的應用中,最適宜分離的物質是什麼

8樓:網友

從色譜分離角度講,分為正相色譜和反相色譜,反相色譜應用較廣,目前大部分方法都是使用反相色譜,可以分離大部分常見物質;正相色譜由於其色譜柱的**及苛刻的使用條件限制了其發展,但在分離異構體,尤其是手性異構體時仍然具有不可替代性。

在正相色譜中,一般採用極性鍵合固定相,矽膠表面鍵合的是極性的有機基團,鍵合相的名稱由鍵合上去的基團而定。最常用的有氰基(-cn)、氨基(-nh2)、二醇基(diol)鍵合相。流動相一般用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機溶劑,如烴類溶劑,或其中加入一定量的極性溶劑(如氯仿、醇、乙腈等),以調節流動相的洗脫強度。

通常用於分離極性化合物。一般認為正相色譜的分離機制屬於分配色譜。組分的分配比k值,隨其極性的增加而增大,但隨流動相中極性調節劑的極性增大(或濃度增大)而降低。

同時,極性鍵合相的極性越大,組分的保留值越大。

該法主要用於分離異構體,極性不同的化合物,特別是用來分離不同型別的化合物。

反相鍵合相色譜法。

在反相色譜中,一般採用非極性鍵合固定相,如矽膠-c18h37(簡稱ods或c18)矽膠-苯基等,用強極性的溶劑為流動相,如甲醇/水,乙腈/水,水和無機鹽的緩衝液等。

目前,對於反相色譜的保留機制還沒有一致的看法,大致有兩種觀點:一種認為屬於分配色譜,另一種認為屬於吸附色譜。

分配色譜的作用機制是假設混合溶劑(水+有機溶劑)中極性弱的有機溶劑吸附於非極性烷基配合基表面,組分分子在流動相中與被非極性烷基配合基所吸附的液相中進行分配。吸附色譜的作用機制是把非極性的烷基鍵合相,看作是在矽膠表面上覆蓋了一層鍵合的十八烷基的「分子毛」,這種「分子毛」有強的疏水特性。當用水與有機溶劑所組成的極性溶劑為流動相來分離有機化合物時,一方面,非極性組分分子或組分分子的非極性部分,由於疏溶劑的作用,將會從水中被「擠」出來,與固定相上的疏水烷基之間產生締合作用。

另一方面,被分離物的極性部分受到極性流動相的作用,使它離開固定相,減少保留值,此即解締過程。顯然,這兩種作用力之差,決定了分子在色譜中的保留行為。.

一般地,固定相的烷基配合基或分離分子中非極性部分的表面積越大,或者流動相表面張力及介電常數越大,則締合作用越強,分配比也越大,保留值越大。在反相鍵合相色譜中,極性大的組分先流出,極性小的組分後流出。

如何論述色譜法分離天然產物

9樓:你在狗叫什麼

hplc分離純化糖類及其衍生物。

糖類是植物光合作用的初生產物,是一類最豐富的天然產物,糖類在植物中的分佈十分廣泛,常佔有植物乾重的80-90%。糖類根據碳鏈的長短可分為單糖、低聚糖和多糖[6]。在糖類的提取方面, 等[7]用製備色譜純化了來自植物sarcocephalus latifolius中的糖類物質。

他們首先將提出滾雹笑的糖類混合物甲醯化合,用正相的phplc 以己烷-乙酸乙酯為流動相進行梯度(90:10到10:90)洗脫,進樣量為250mg 將其分離為11個組分,每個組分再用phplc 或製備薄層色譜等進一步純化和,發現上一步得到的組分有的是純品有的為混合物,經過兩次純化後得到3個純品。

將這些純品用配有示差法折光檢測器的hplc 定量,用核磁確定化合物的結構。

2 、hplc 分離純化萜類化合物。

萜類肆帶化合物是廣泛存在於植物和動物體內的有機化合物,隨著人類對萜類化合物的深入研究和不斷的開發利用,其分析方法也得到了快速的發展,高效液相色譜也廣泛的應用於萜類化合物的研究中[8]。張建州等[9]用hplc 法測定樟腦丸中奈的含量,並與gc 法進行比較。結果表明,hplc 法所消耗的樣品量少僅為gc 法的1/100-1/10,hplc 的檢出下線為 。

3、hplc 分離純化黃酮類化合物。

黃酮類化合物是天然產物中非常重要的一類化合物,現代證大含明黃酮類化合物是一種很強的抗氧化劑, 可有效清除體內的氧自由基, 可以降低膽固醇, 改善血液迴圈, 預防心腦血管疾病, 可以**糖尿病, 具有抗腫瘤、抗炎等作用[10-14]。曲麗萍等[15]從淡豆鼓中提取黃酮類物質,先採用索氏提取法除去脂溶性成分,再經過1300型大孔樹脂初步分離純化,再用不同濃度的乙醇梯度洗脫,其中對40%乙醇。

採用色譜法對樣品分析時,欲使樣品中各組分完全分離的條件

10樓:

摘要。是將樣品中各組分彼此分離,組分要達到完全分離,兩峰之間的距離必須足夠遠,兩峰之間的距離是由組分在兩相之間的分配係數決定的,即與色譜過程的熱力學性質有關。但是兩峰之間雖有一定距離,如果每個峰都很寬,以致彼此重疊,還是不能分開。

這些峰的寬或窄是由組分在色譜柱中的擴散和傳質行為決定的,即與色譜過程的動力學性質有關。因此,要從熱力學和動力學兩方面來研究色譜行為,提出了塔板理論和速率理論。

採用色譜法對樣品分析時,欲使樣品中各組分完全分離的條件。

內標法是色譜定量分析中是一種重要技術。使用內標法時,在樣品中加入一定量的標準物質,它可被色譜拄所分離,又不受試樣中其它組分峰的干擾,只要測定內標物和待測組分的峰面積與相對響應值,即可求出待測組分在樣品中的百分含量。

是將樣品中各組分彼此分離,組分要達到完全分離,兩峰之間的距離必須足夠遠,兩峰之間的距離是由組分在兩相之間的分配係數決定的,即與色譜過程的熱力學性質有關。但是兩峰之間雖有一定距離,如果每個峰都很寬,以致彼此重疊,還是不能分開。這些峰的寬或窄是由組分在色譜柱中的擴散和傳質行為決定的,即與色譜過程的動力學性質有關。

因此,要從熱力學和動力學兩方面來研究色譜行為,提出了塔板理論和速率理論。

請舉例說明放棄也是一種美麗

很簡單,你剪頭髮時,理髮師把你的頭髮剪掉。過長的頭髮你不要了,放棄了這些長頭髮。剪好後,頭髮變整潔了,你就美麗了。聞君有兩意,故來相與絕。愛情,追不到的就放棄,勇敢點,留下回憶是美麗 樹葉放棄了枝幹,化作了肥料,卻是為了來年那一抹翠 放棄是為了成全。放棄建一座工廠,讓生態環境更美麗 放棄一天開車,讓...

請舉例說明一種材料對人類的生活或者社會的發展所起到的作用

符合這種條件的材料很多,比如木材,鋼鐵 銅 塑料等等。與人類生活息息相關,極大地改變了人類的生活。塑料 它耐腐蝕 重量輕 可以注塑成為任何設計好的形狀 有足夠的抗拉強度 延展性 可任意彎曲。所以在包裝 機械 裝飾 防水 管道 建築 電子儀器 飾品等各個行業都能找到它的身影,它還可以 而重複利用 為人...

如何將酵母菌培養鑑定到種?舉例說明

把酵母菌接種到麥芽汁固體培養基上,讓它長成菌落,觀察其菌落的形態 顏色 質地 邊緣 表面等特徵。把它再接種到液體麥芽汁培養基中,觀察是否能產生醭 試管或培養儀器表面壁上能否形成菌環,培養液中是否產生沉澱 混濁程度等。另外,還要取樣在顯微鏡下觀察其單細胞的形態 大小 能否形成孢子 孢子的大小以及繁殖方...