1樓：搞一搞好
（1）收穫細胞，加入適量細胞ip裂解緩衝液（含蛋白酶抑制劑），冰上或者4℃裂解30min, 12,000g離心30 min後取上清；（2） 取少量裂解液以備western blot分析，剩餘裂解液將1μg相應的抗體和10-50 μl protein a/g-beads加入到細胞裂解液，4°c緩慢搖。
什麼是免疫共沉澱？和免疫沉澱有啥區別
2樓：流式細胞術原理
免疫共沉澱基於抗原抗體特異性結合的原理，體外驗證兩種分子之間是否存在相互作用的技術。它是免疫沉澱的延伸。基本原理是在含有已知抗原的細胞裂解液中，將已知抗原作為靶蛋白，檢測裂解液中可能存在與之有相互作用的蛋白。
加入特定的抗體以及protein a-beads，會形成「抗原-抗體-protein a-beads」的複合物。在抗原抗體特異性結合沉澱靶蛋白的同時，存在相互作用的蛋白也能被沉澱下來，最終得到「蛋白-蛋白」的複合物。驗證是否有相互作用蛋白的存在。
免疫沉澱與免疫共沉澱實驗原理及方法大致相似，所不同的是在免疫共沉澱中對靶蛋白的結合由另一個與之發生相互作用的蛋白所替代。因此實驗屬於ip還是co-ip取決於實驗的目標是目的抗原還是相互作用蛋白質。
3樓：匿名使用者
什麼是免疫
共沉澱？和免疫沉澱有啥區別
免疫共沉澱的缺點：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱：
免疫共沉澱（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉澱和免疫沉澱有區別嘛？
4樓：匿名使用者
如果說區別的話，免疫沉澱是單一的特異性抗
體結合其對應抗原，使之聚集沉澱。免疫共沉澱是a抗體結合a抗原，b抗體結合b抗原，如果a抗原能與b抗原相互作用而結合的話，最終aabb都連在一起沉澱，檢測方法可以使用ab在一起激發熒光，分開無熒光，所以當檢測到熒光則說明ab有相互作用，無則沒相互作用，也可使a固定在固相載體，檢測b，若檢測到b則ab有相互作用，若沒檢測到則無相互作用。基本來說免疫沉澱是看有沒有抗原抗體結合，免疫共沉澱則是看兩個抗原有無相互作用
免疫共沉澱與免疫沉澱區別
5樓：匿名使用者
不同的說法而已，實質一樣。指的都是用抗體把相應蛋白拉下來，在用相應方法把他們分離出來，常用page膠。
6樓：維基生物
可能你是兩個概念，應該說的是ip和pulldown，兩者都是用蛋白來拉蛋白。ip是拉與目標蛋白互做的蛋白質，但是這個互做是保持了細胞內生物學狀態，就是說更接近真實狀態。pulldown就是拉目的蛋白質的互做蛋白，沒有保持獨立的活性，可能會拉下一些假陽性的的蛋白。
從實驗上來說，ip要優於pulldown，但是ip的實驗難度比較到，需要有ip級的抗體。
pull-down assay和免疫共沉澱的區別
7樓：匿名使用者
都是用來研究蛋白質相互作用的技術
免疫共沉澱的話蛋白質是處於天然狀態，蛋白質的相互作用可以在天然狀態下進行，可以避免認為影響，還可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白複合體。
但是問題是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；而且必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，如果抗體選錯了就沒有結果。
gst pull-down是將gst融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上，與溶液中的目的蛋白結合。可以用來確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間的新的相互作用，證實探針蛋白與已知蛋白質間可疑的相互作用。
但問題是這個方法可能會出現假陽性。也就是也許是因為電荷作用的影響造成的吸附，而不是生理性的相互作用。
請教gst pull-down assay和免疫共沉澱的區別
8樓：飛鴻love巨集
gst pull-down一般指用一個帶gst標籤的重組蛋白，與目的蛋白進行孵育，最後用結合gst的beads拉下相互作用複合物。
免疫共沉澱一般是用某一蛋白的抗體，在細胞裂解液中與相應的蛋白結果，用protein a/g將抗原抗體複合物拉下，最後在拉下的複合物中檢測目的蛋白的實驗。
二者都是用於檢測蛋白相互作用的實驗。
區別是pull-down一般是驗證 體外 相互作用；免疫共沉澱一般用於檢測細胞水平的 體內 相互作用。
9樓：cofe_飛
兩者原理和操作上都有一定的區別，比如做gst pull down的蛋白要有標籤，但是做免疫共沉澱就用不到，但是做免疫共沉澱需要額外準備抗體。（當然gst蛋白也需要準備抗體，畢竟事後要做wb的）
另外兩者都可以測兩種已知蛋白是否有相互作用或利用已知蛋白去調未知蛋白。本質上沒什麼區別，根據自己的情況選擇吧。
最後一點要說的就是，co-ip比較好的一點，就是可以模擬體內互作的情況，結果更真實一點。
請教做過免疫共沉澱的高手們談談該方法和用途
10樓：南大飛秒
飛秒檢測發現免疫共沉澱是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞記憶體在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。
當用預先固化在argarose beads上的蛋白質a的抗體免疫沉澱a蛋白，那麼與a蛋白在體內結合的蛋白質b也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對b蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。
這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
免疫沉澱實驗的操作步驟比較多，同時由於在非變性條件下進行實驗，所以要得到一個完美的實驗結果，不僅需要高質量的抗體，同時對免疫沉澱體系也需要有嚴格的控制指標。免疫沉澱實驗從：蛋白樣品處理；抗體-agarose beads孵育；抗體-agarose beads複合物洗滌到最後的鑑定，每步都非常關鍵，需要嚴格控制實驗流程中每個關鍵步驟的質量，才能最終達到你的實驗目的。
其優點為：（1）相互作用的蛋白質都是經翻譯後修飾的，處於天然狀態；（2）蛋白的相互作用是在自然狀態下進行的，可以避免人為的影響；（3）可以分離得到天然狀態的相互作用蛋白複合物。缺點為：
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用； （3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
elisa和免疫共沉澱有什麼不同？
11樓：匿名使用者
簡單地說elisa是檢測是否存在某物質（如某種蛋白），而免疫共沉澱是為了檢測目標蛋白與其他蛋白是否相互作用。elisa一般方法是將目的物質的抗體加入，再加入能夠結合該抗體的另一種被修飾的抗體，後者修飾部分是具有一種酶活性可將某種物質催化形成有色物質，因此顯色陽性反應說明存在目標物質。而免疫共沉澱是將蛋白x抗體結合在固定相上，將細胞非變性裂解後浸泡固定相，吸取沒有結合的雜質後檢測被結合組分，這樣所有在細胞中能結合x的蛋白質就一起被分離出來，因此可確定體內條件下蛋白x是否和其他蛋白相互作用。
12樓：匿名使用者
elisa 是酶聯免疫吸附檢測技術,是用來檢測抗原或抗體的一種技術
當人工合成一些人工抗原時,還可以檢測一些半抗原物質,如氯黴素,三聚氰胺,等等.而免疫共沉澱是用抗體將相應特定分子沉澱的同時，與該分子特異性結合的其他分子也會被帶著一起沉澱出來的技術。這種技術常用於驗證蛋白質之間相互特異性結合。
免疫共沉澱的缺點
13樓：北京索萊寶科技****
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱：
免疫共沉澱（co-immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
免疫共沉澱的注意事項
(1) 確保共沉澱的蛋白是由所加入的抗體沉澱得到的，而並非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助於避免汙染的發生；
(2) 要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中新增抗體後不會引起共沉澱；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由於細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。
14樓：▆▆▆丈
（1）可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質－蛋白質相互作用；
（2）兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；
（3）必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若**不正確，實驗就得不到結果，方法本身具有冒險性。
（4）靈敏度沒有親和色譜高。
免疫共沉澱抗體的選擇,免疫共沉澱的缺點
可以用兔抗人的其他抗體做對照，已知不與你的目的蛋白有結合的 希望能解決您的問題。免疫共沉澱的缺點 1 可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質 蛋白質相互作用 2 兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用 3 必須在實驗前 目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，所以，若 不正確，實...
免疫共沉澱雜帶太多，怎麼處理
免疫共沉澱是 bai為了檢測目du標蛋白與其他蛋白zhi 是否相互作用dao.elisa一般方法是將目的物質專的抗體加屬入,再加入能夠結合該抗體的另一種被修飾的抗體,後者修飾部分是具有一種酶活性可將某種物質催化形成有色物質,因此顯色陽性反應說明存在目標物質.而免疫共沉澱是將蛋白x抗體結合在固定相上,...
蛋白質大小會影響免疫共沉澱結果嗎
這個過程簡單講就是這麼幾步 抽蛋白 掛抗體到beads上，做成有親和力的柱子 其實所謂 柱子 就是帶有抗體的beads裝到ep管裡 抽出來的蛋白去和柱子孵育，抗體識別的蛋白和與此蛋白互做的蛋白就掛到柱子上了 洗滌，將抗體不能結合的蛋白洗掉 洗。免疫共沉澱的缺點 1 可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質...