如何判斷某個轉錄因子和它的靶基因啟動子序列發生了結

2021-05-28 05:20:03 字數 714 閱讀 4147

1樓:匿名使用者

轉錄因子一半都結合覆在被制調控基因

的promoter區域,你可以做一個chip-seq實驗,然後在基因組資料庫中定位這些與該轉錄因子結合的dna區域,那麼這些區域的下游附近的基因就很可能是受該轉錄因子調控的基因。然後在針對這些疑似基因做轉錄因子ko之後的該基因mrna水平檢測(realtimepcr)確定是否受其調控。

如何證明某個基因受轉錄因子的直接調控,簡述實驗設計

2樓:匿名使用者

如果此轉錄因子能夠啟用靶啟動子,則熒光素酶基因就會表達,從而對基因的表達起內抑制或增強的作用容,通過檢測熒光的強度可以測定熒光素酶的活性:(1)構建一個將靶啟動子的特定片段插入到熒光素酶表達序列前方的報告基因質粒,熒光素酶與底物反應,如pgl3-basic等。(3) 加入特定的熒光素酶底物轉錄因子是一種具有特殊結構,也稱為反式作用因子。

熒光素酶報告基因實驗(luciferase assay)是檢測這類轉錄因子和其靶啟動子中的特異順序結合的重要手段,這些特異性的序列被稱為順式作用元件、行使調控基因表達功能的蛋白質分子。某些轉錄因子僅與其靶啟動子中的特異序列結合。(2) 將要檢測的轉錄因子表達質粒與報告基因質粒共轉染293細胞或其它相關的細胞系,轉錄因子的dna結合域和順式作用元件實現共價結合。

其原理簡述如下,從而判斷轉錄因子是否能與此靶啟動子片段有作用,熒光素酶的表達量與轉錄因子的作用強度成正比,產生熒光

轉錄因子對特定基因的作用可以是既抑制又啟用的嗎

當然是bai既可以啟用又可以du抑制。一個轉錄因子zhi可以結合到一個dao 基因啟動子的多回個序列上,這些序列可以相答同,也可以不相同,可以是正向的,也可以是反向互補的。即使結合相同的序列,有些位點有可能啟用,有些位點則有可能抑制。87版紅樓夢劇照 曹雪芹自題詩 如何證明某個基因受轉錄因子的直接調...

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