klenow片段和大腸桿菌dna聚合酶i有何異同

2021-05-16 14:21:49 字數 6097 閱讀 1733

1樓:悪が美徳

相同點:①都具有klenow片段序列②都具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性。

不同點:

①dna聚合酶i還具有5'→3'外切酶活性。

②主要用途不同。

a.dna聚合酶i的用途

i.製備高比活度dna探針

ii.用於dna連線後的大缺口填充

iii.用於dna的序列分析

b.klenow酶

i.補平由核酸內切酶產生的5'粘性末端

ii.dn**段的同位素末端標記

iii.cdna第二鏈的形成

iv.雙脫氧末端終止法(sanger)法測定dna序列③僅有dna聚合酶i能夠催化切口平移反應

④klenow酶不能直接用於3'突出末端的dna的標記

2樓:匿名使用者

相同點:都能以dna為模板,從5'向3'進行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應。

不同點1、作用底物不同。rna聚合酶底物是ntp;dna聚合酶底物是dntp。

2、rna聚合酶作用不需要引物,而dna聚合酶作用需要引物。

3、rna聚合酶本身具有一定的解旋功能,而dna聚合酶沒有,當需要解開雙鏈的時候要解旋酶和拓撲異構酶的幫助。

4、rna聚合酶只具有5『到3』端的聚合酶活性,而dna聚合酶不僅有5『到3』端的聚合酶活性,還具有3『到5』端的外切酶活性。保證dna複製時候校對,所以複製的忠實性高於轉錄的。

5、rna聚合酶通常作用於轉錄過程;dna聚合酶通常作用於dna複製過程

klenow酶與大腸桿菌dna聚合酶i在結構上和功能上的主要區別是什麼?

3樓:忘性大啊

klenow酶是 hans klenow 2023年用枯草桿菌蛋白酶處理大腸桿菌dna聚合酶ⅰ時,得到的兩個片段中分子量較大的一個,它含有605個氨基酸殘基(324~928),並有大小兩個結構域,其中大結構域(518~928)具有5'→3'聚合酶活性,小結構域(324~517)則具有3'→5'外切酶活性。缺少一個5』-3『的外切酶活性,5』-3『的外切酶活性在蛋白質的n端,枯草桿菌蛋白酶切掉n端使其喪失該活性。

功能上的區別:dna聚合酶i可通過dna缺口平移的方法制備dna探針。而klenow酶主要用於缺口平移標記dna,也用於dna的缺口補平和延伸。

還在cdna克隆中用於第二條cdna鏈的合成。

4樓:法師藥材店

klenow酶實際上應該叫做klenow fragment (klenow 片段),它實際上是大腸桿菌dna聚合酶i經過枯草蛋白酶或者胰蛋白酶水解後得到的一個片段。這個片段具有5『-3』端的dna聚合酶活性和3『-5』端的外切酶活性,但比起大腸桿菌dna聚合酶i,缺少一個5』-3『的外切酶活性。在基因工程中,klenow片段經常被用於雙鏈dna粘性末端的補平。

原核生物的三種dna聚合酶有何共同特徵和區別?

5樓:zzx梓

首先,原核生物dna聚合酶分為ⅰ,ⅱ,ⅲ。

一、共同特徵

1、具有5』→3』聚合酶活性,這就決定了dna只能沿著5』→3』方向合成;

2、需要引物,dna聚合酶不能催化dna新鏈從頭合成,只能催化dntp加入核苷酸鏈的3'-oh末端。因而複製之初需要一段rna引物的3』一oh端為起點,合成5』→3』方向的新鏈。

二、區別:

1、dna聚合酶i是單鏈多肽,可催化單鏈或雙鏈dna 的延長;

2、dna聚合酶ii則與低分子脫氧核苷酸鏈的延長有關;

3、dna聚合酶iii在細胞中存在的數目不多,是促進dna鏈延長的主要酶.功能

擴充套件資料:

dna聚合酶分類:

1.大腸桿菌dna聚合酶i

大腸桿菌dna聚合酶i是大腸桿菌pola基因編碼由1000個氨基酸殘基組成的單鏈多肽,具3種酶活性:5』→3』dna聚合酶活性;5』→3』及3』→5』外切核酸酶活性。

2、klenow聚合酶(klenow大片段)

大腸桿菌dna聚合酶i的3個結構功能域分別對應著3種不同酶活性。氨基端(1~326)具5'→3』外切酶活性;中間區域(326~542)具3'→5』外切酶活性;羧基端(543~928位)具5』→3』dna聚合酶活性。

枯草桿菌蛋白酶可將大腸桿菌dna聚合酶i水解成大小2個片段:n端小片段包含1~326位殘基,具5』→3』外切酶活性;而c端大片段包含326~928位殘基,只具有5』→3』聚合酶活性和3'→5』外切酶活性,稱作klenow聚合酶或klenow大片段。

3、taqdna聚合酶

taqdna聚合酶是一種耐高溫的依賴於dna模板的dna聚合酶,**於極度嗜熱的嗜熱水生菌thermus aquaticus yt一1,故稱作taq dna聚合酶,一般應用於pcr反應。

taqdna聚合酶是一種mg2+依賴酶,反應體系中必須有mg2+存在,然而保持適當的mg2+濃度十分重要,因為mg2+濃度過高或過低均會影響引物與模板的結合、模板與pcr產物的解鏈溫度、引物二聚體的形成以及酶的活性與精確性。

4、逆轉錄酶

逆轉錄酶是一種依賴於rna的dna聚合酶,也稱為rna指導的dna聚合酶。,可以rna為模板有效地催化合成互補dna(***plementary dna)單鏈,並進而合成dna第二條鏈。逆轉錄酶普遍存在於含rna的逆轉錄病毒中,主要有禽源(amv)和鼠源(mlv)兩種,這兩種酶均已被克隆並在大腸桿菌中表達。

6樓:匿名使用者

首先,原核生物dna聚合酶分為ⅰ,ⅱ,ⅲ.ⅰ主要是起修復的作用(比如光修復),還有就是把rna引物切除後的空隙填補起來,ⅱ是參與原核生物sos修復的酶,ⅲ是原核生物在dna延長中起主要作用的酶. 再來說真核生物,真核生物的dna聚合酶分為α,β,γ,δ,ε,.

首先我來說三個和原核生物中的ⅰ,ⅱ,ⅲ功能相同的酶.ε類似於原核生物dna聚合酶ⅰ,β類似於原核生物dna聚合酶ⅱ,δ類似於原核生物dna聚合酶ⅲ.α具有引物酶活性,而γ則是作為複製真核生物線粒體內的dna所需要的酶.

什麼是pcr?

7樓:鬆恭載琬

pcr(polymerase

chain

reaction

)即聚合酶鏈式反應

pcr技術的基本原理:該技術是在模板dna、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下,依賴於dna聚合酶的酶促合成反應。dna聚合酶以單鏈dna為模板,藉助一小段雙鏈dna來啟動合成,通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈dna模板中的一段互補序列結合,形成部分雙鏈。

在適宜的溫度和環境下,dna聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3´-oh末端,並以此為起始點,沿模板5´→3´方向延伸,合成一條新的dna互補鏈。

pcr反應的基本成分包括:模板dna(待擴增dna)、引物、4種脫氧核苷酸(dntps)、dna聚合酶和適宜的緩衝液。類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。

pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板dna的高溫變性:模板dna經加熱至93℃左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板dna與引物的低溫退火(復性):

模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;③引物的適溫延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna

鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘,

2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

8樓:柚夏

pcr是聚合酶鏈式(polymerase chain reaction)反應的簡稱,是一種將幾個或幾十個拷貝數dn**段擴增至上百萬份拷貝的方法,這是迄今為止最為重要的技術之一。pcr技術的影響不僅僅侷限於生物科學領域,幾乎人人都可以感受到pcr所帶來的改變,在親子鑑定以及犯罪調查中pcr技術便有廣泛應用。

pcr可以被認為是與發生在細胞內的dna複製過程相似的技術,其結果都是以原來的dna為模板產生新的互補dn**段。細胞中dna的複製是一個非常複雜的過程。參與複製的有多種因素。

pcr是在試管中進行的dna複製反應,基本原理與細胞內dna複製相似,但反應體系相對較簡單。

pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:

①模板dna的變性:模板dna經加熱至94℃左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;

②模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;

③引物的延伸:dna模板--引物結合物在taq酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈。

重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

參考資料

pcr技術原理.丁香通[引用時間2018-5-11]

9樓:春玉英進婷

pcr是聚合酶鏈式反應。這個反應的發生需要目標dna,也需要聚合酶(要不怎麼叫聚合酶鏈式反應呢?)還有4種脫氧核苷酸a、g、c、t。

(注意,a、g、c、t是他們的鹼基,在一定情況下也能指代核糖核苷酸核苷酸或脫氧核苷酸。)

我估計能問這個問題的人不是個初學者就是個高深莫測的人……

10樓:自由之聲了

是手遊princess connect!re dive(公主連結r)的簡稱

11樓:匿名使用者

聚合酶鏈鎖反應,polymerase chain reaction,簡稱pcr,是一種分子生物學技術,用於放大特定的dn**段。可看作生物體外的特殊dna複製。

※pcr基本原理

pcr技術的基本原理類似於dna的天然複製過程,其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。pcr由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:

①模板dna的變性:模板dna經加熱至93℃左右一定時間後,使模板dna雙鏈或經pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;

②模板dna與引物的退火(復性):模板dna經加熱變性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;

③引物的延伸:dna模板--引物結合物在taqdna聚合酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按鹼基配對與半保留複製原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留複製鏈重複迴圈變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的「半保留複製鏈」,而且這種新鏈又可成為下次迴圈的模板。每完成一個迴圈需 2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

到達平臺期所需迴圈次數取決於樣品中模板的拷貝。

※pcr反應特點

特異性強

pcr反應的特異性決定因素為:

①引物與模板dna特異正確的結合;

②鹼基配對原則;

③taq dna聚合酶合成反應的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循鹼基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及taq dna聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。

再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。

靈敏度高

pcr產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10- 12)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,pcr的靈敏度可達3個rfu(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌。

簡便、快速

pcr反應用耐高溫的taq dna聚合酶,一次性地將反應液加好後,即在dna擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性汙染、易推廣。

對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養細胞,dna 粗製品及rna均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛髮、細胞、活組織等dna擴增檢測。

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