平末端酶切位點有哪些?怎樣判斷酶切位點是粘性末端還是平末端

2021-04-19 21:28:51 字數 1202 閱讀 5197

1樓:匿名使用者

怎樣判斷酶切位點是粘性末端還是平末端

用限制酶切割後得到的末

端齊平就是平末內端,一長一短就是粘容性末端根據限制性內切酶切割dna所產生的產物末端,發現限制性內切酶對dna的切割有兩種方式,即平切和交錯切.所謂平切,就是限制性內切酶在dna雙鏈的相同位置切割dna分子,這樣產生的末端就是平末端.交錯切就是限制性內切酶在dna雙鏈的不同位置切割dna,產生的dn**段的末端不是平齊的

2樓:因為你我會熱愛

環狀dna載體,那就抄

是質粒,或者粘粒什

襲麼的了。。

如果購買的是商業用載體的話,如果是多酶切位點那段的酶切位點去掉是不會不會使目的基因所表達的蛋白質失活的,但是如果是不在多酶切位點的話,就可能使其它的「框架」受到影響,比如amp抗性或者clo抗性的失效(致命影響後期篩選)等。

如果是多酶切位點的話,此區域的酶切位點不可能通過雙酶切去掉,所以建議設計合理的pcr引物進行此敲基因操作,這個跟進行定點突變的原理差不多,所以只要設計一個引物就可以了,但是該試劑盒**比較貴,在兩萬左右(20次反應),外加引物設計及後期測序要¥2500左右。

原理:其實就是pcr反應原理:

dna的半保留複製是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈dna在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在dna聚合酶與啟動子的參與下,根據鹼基互補配對原則複製成同樣的兩分子挎貝。在實驗中發現,dna在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。

因此,通過溫度變化控制dna的變性和復性,並設計引物做啟動子,加入dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的體外複製。通過設計特定的引物來達到改變基因的效

把目的基因連線到質粒上構建重組質粒時該如何選擇限制性內切酶?引物如何設計?

3樓:法師藥材店

重組時選復擇你的目的制基因上沒有,而質粒的多克隆位點上有的酶切位點,一般重組質粒需要兩個酶,所以你要選擇兩個酶切位點,注意儘量避免使用切出平末端的酶。重組引物設計時首先你要確定你選擇的兩個酶在的酶切位點在質粒的多克隆位點上的排列順序,這個不能錯,不然序列就會接反。一般設計重組引物的時候,在上游引物5』端前面加上載體多克隆位點排列在前面的酶切位點序列,在下游引物5『端前面則加上後面的一個酶切位點,酶切位點加好後,注意5』端還需要加上保護鹼基,這個具體你可以去查下內切酶的說明書。

然後你要注意,根據你的載體需要,是否要在引物上帶上啟動子和終止子。

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平靜,平面,平時,平臺,平板,平均,平衡,平安,平方,平凡,平常。平組詞有哪些詞語 如下 1 平直 p ng zh 又平又直。2 平抑 p ng y 抑制使穩定。3 平紋 p ng w n 指經紗 緯紗相互一上一下地交織成的紋路。市布 府綢 紡綢 凡爾丁等都是平紋組織。4 平價 p ng ji 舊指...

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鹼性食物有哪些怎樣判斷食物的酸鹼性

答 食物的酸鹼性,並不是憑口感,而是經過消化後在體內吸收代謝的結果來判定的。如果食物代謝後所產生的磷酸根 硫酸根 氯離子等離子比較多時,就容易在體內產生酸性反應,那麼這種食品也就屬於酸性食品。如產生的鈉離子 鉀離子 鎂離子 鈣離子較多,就容易在體內形成鹼性反應,這種食品就屬於鹼性食品。也就是說,含有...