薄層層析的跑樣距離,簡述薄層層析法的基本操作方法。

2022-12-01 17:35:02 字數 3677 閱讀 3113

1樓:上善若水

跑樣的距離當然和時間,還有樣品的純度有關。樣提升跑樣的距離和速度,首先實驗操作要規範,然後就要看時間了,若是板的質量不好或是樣品不高,那實驗效果將大打折扣了。

和劑的關係是有的,不過實驗室中劑都已經選擇好的,對多組分的樣品能否獲得滿意的分離,決定於劑的選擇。劑的選擇條件:①對的所需成分有良好的溶解性;②可使成分間分開;③待測組分的rf在0.

2~0.8之間,定量測定在0.3~0.

5之間;④不與待測組分或吸附劑發生化學反應;⑤沸點適中,黏度較小;⑥後組分斑點圓且集中;⑦混合溶劑最好用新鮮配製。

2樓:

1.薄層層析的特點:薄層層析在應用與操作方面的特點與柱層析的比較。

2.吸附劑的選擇:薄層層析用的吸附劑與其選擇原則和柱層析相同。主要區別在於薄層層析要求吸附劑(支援劑)的粒度更細,一般應小於250目,並要求粒度均勻。

用於薄層層析的吸附劑或預製薄層一般活度不宜過高,以ⅱ~ⅲ級為宜。而距離則隨薄層的粒度粗細而定,薄層粒度越細,距離相應縮短,一般不超過10釐米,否則可引起色譜擴散影響分離效果。

3.劑的選擇:薄層層析,當吸附劑活度為一定值時(如ⅱ或ⅲ級),對多組分的樣品能否獲得滿意的分離,決定於劑的選擇。中草藥化學成分在脂溶性成分中,大致可按其極性不同而分為無極性、弱極性、中極性與強極性。

但在實際工作中,經常需要利用溶劑的極性大小,對劑的極性予以調整。

簡述薄層層析法的基本操作方法。

3樓:

薄層層析又叫薄層色譜,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用於少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在製作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精製樣品,此法特別適用於揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的質。此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種「預試」。

薄層色譜(thin layer chromatography)常用tlc表示,又稱薄層層析,屬於固-液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點。一方面適用於小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.

01μg)的分離;另一方面若在製作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精製樣品。故此法特別適用於揮發性較小或在較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物資。

此外,在進行化學反應時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。

薄層色譜是在被洗滌乾淨的玻板(10×3cm左右)上均勻的塗一層吸附劑或支援劑,帶乾燥、活化後將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加於離薄層板一端約1cm處的起點線上,涼幹或吹乾後置薄層板於盛有劑的槽內,浸入深度為0.5cm。待劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,乾燥後噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。

薄層層析的定量方法

4樓:一騎遲悖営pj邡

可分為洗脫測定法、薄層層析法和原位掃描法: 薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為矽膠、氧化鋁等。

薄層層析和其他層析法一樣,除吸附法外,也可進行分配、離子交換、分子排阻等機理的層析,即將鋪制薄層的材料相應換為塗以固定相的載體、離子交換劑、凝膠等,其操作與吸附法基本相同。

制板 鋪制薄層板時,要求基底板潔淨平整,可用幹法或溼法鋪制。現常用溼法制板,即將吸附劑和粘合劑(如燒石膏)按一定比例混合,加入適量水調勻,用塗布器將此勻漿緩慢地移過基底板,放置晾乾,再經適當烘烤活化後即可使用。如不加粘合劑和水,直接將吸附劑均勻地鋪成薄層,則為幹法制板。

現在市場上已有各種制好的薄層板**,統稱預製板。

有多種方式,以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置,將溶劑加於低部,使之自下向上移動。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端,使其自上向下流動。

平行時,將板平放,溶劑被吸上至薄層板點有樣品的一端,進行。使用圓形薄層板時,將樣品點在圓心附近,使溶劑自圓心向圓周方向移動,稱為環形或徑向;將樣品點在圓周位置,使溶劑自圓周向圓心移動的為向心,適用於f值大的組分的分離。將點樣品處附近的吸附劑颳去,使溶劑只能通過樣品點附近的較窄部分前進,因而溶劑前緣呈弧形的方式,也稱徑向,這種方式對較難分離的組分可能效果好些。

一次後取出薄層板使溶劑揮發,再用同一溶劑或換用其他溶劑再次沿此方向的稱多次。將樣品點在方形薄層板的一角,先沿著一個方向,然後將板轉動90°,再沿著另一方向的為雙向。多次和雙向都可加強分離效果。

特點 操作簡便,裝置簡單,除光密度計外,不需特殊裝置,分離效果較好,時間較短,一塊板上可同時分離許多樣品。除低沸點物質外,各種無機和有機化合物都可進行分離。

應用和發展 廣泛應用於石油、化工、醫藥、生化等方面。樣品用量一般為幾至幾百微克,是一種較實用、有效的微量分離分析方法。此法也可用於分離製備較大量的樣品,即使用較大較厚的薄層板,將樣品溶液在起始點處點成條帶狀,這樣可以分離毫克量樣品。

高效液相色譜法是用微細顆粒得到高效分離的辦法,也已用於薄層層析。使用5~10微米的吸附劑制板,可得較好的分離效果,為與一般的薄層層析法相區別,稱為高效薄層層析。其優點是樣品量少(只需納克量樣品)、距離小、時間短,是薄層層析法的一個重要發展。

薄層層析的遷移率怎麼算

5樓:張曉慶張曉慶

溶液中帶電粒子在電場 (e)中向著與它相異電荷的電極移動,它的移動速度(v)是電場(e)和粒子的有效遷移率(m)的乘積,即:v=me

離子的有效遷移率是一個由許多因素(包括離子半徑、溶劑化作用、介電常數、溶劑粘度、離子形狀和電荷、ph、解離度和溫度等)決定的物化係數。不同有效遷移率的粒子有不同的移動速度,因而可以彼此分離。

一般情況下電泳中蛋白質分子量對數與遷移率呈線性關係 具體由凝膠的情況決定 線性的範圍也是一定的

6樓:匿名使用者

rf=斑點至原點距離/溶劑前緣至原點距離

薄層層析用的矽膠板如何活化

7樓:傅豆蕾他爸看社會

薄層層析用的矽膠板放在105度環境中烘30min即可完成活化。剛開啟的塑料封裝的可以不活化,開啟放置一段時間後再用是需要活化。 活化的目的是除除矽膠中吸附的水分子,增加矽膠板的吸附能力。

還有一個非常簡單的判別分類的辦法就是,不同型號的矽膠在於其中石膏含量的不同,這一點體現在矽膠的粘稠度不同,石膏含量越高越粘稠。這個在賣矽膠的瓶子上都有標識,比如矽膠h就很稀鬆,矽膠g一般粘稠度還是比較適中的。

擴充套件資料

薄層室需預先用劑飽和,可在室中加入足夠量的劑,並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡。將點好樣品的薄層層析矽膠板放入室的劑中。

浸入劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入劑中),密封室蓋,待至規定距離,取出薄層板,晾乾,並進行後續的檢驗。

8樓:匿名使用者

活化的目的是除除矽膠中吸附的水分子,增加矽膠板的吸附能力;一般剛開啟的塑料封裝的可以不活化,開啟放置一段時間後再用是需要活化,105度烘30min即可。

化工行業上的名詞「矽膠板」只是一個簡稱,其全稱應該叫薄層層析矽膠板,也叫高抗撕矽膠板它用高純度薄層層析矽膠(粉狀)調入一定量的粘結劑噴製成,其板面一般為玻璃,國外比較流行使用鋁箔來做附著板面。

矽膠板特點:

1. 分離效果好,塔板數高。

2. 點樣斑點小,便於系列分析。

3. 分離時間短。

4. 靈敏度高,斑點清晰,不擴散。

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