1樓:生活小達人李悠悠
農桿菌轉化法和感受態細胞法都是老敗常見的基因轉移方法,但它們的操作原理和應用範圍有所不同。
農桿菌轉化法是一種常用的植物基因轉移技術,它利用農桿菌與植物細胞表面的特定受體結合,將外源dna匯入植物細胞。該方法適用於許多植物,尤其是經濟作物,如玉公尺、小麥、水稻等。該方法具有轉移效率高、適用範圍廣等優點,但需要特定的農桿菌菌株和受體植物。
感受態細胞法則是一種常用的細胞基因轉移技術,它通過改變細胞膜的滲透性,將外源dna直接匯入細胞內。該方法適用於多種細胞型別,如哺乳動物細胞、昆蟲細胞等。該方法具有操作簡便、轉移效率高知含歷等優點,但需要特定的轉染試劑和細胞型別。
因此,農桿菌轉化法和感受態細胞法在基因轉移技術應用中各有優勢,具搭搜體選擇方法應根據實驗需求和研究物件的特點進行選擇。
2樓:端莊且誠摯丶赤子
衣桿菌轉化法和感受態細胞法都是常用的基因工程技術,用於將外源dna匯入到細胞內。兩者主要區別在於轉化體系和適用範圍上。衣桿菌轉化法是利用衣原體侵入細胞將dna轉脊拆兆化到目的細胞內,適用於革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰性菌,但御租對於一些難處理的革蘭氏陰性菌效果不理想;而感受態細胞法是通過預櫻租處理使細胞變為「感受態」,然後加入外源dna,使其與細胞壁膜內的受體結合而進入細胞內,適用於大多數細菌、酵母等。
農桿菌感受態的區別
3樓:
摘要。農桿菌感受態主要有三類:1.
親感態:這種狀態下,細菌可以感受到周圍的化學物質或環境的變化,並對其作出適當反應。例如,當細菌感受到尋找到另外一種細菌即細菌群體形成之前,會釋放一種化學物質,這種化學物質就可以被其近距離的細菌感受到。
2. 易感態:當細菌處於易感態時,它們可以感受到一類化合物叫做乳糖,雖然乳糖不是自身需要使用的營養物質,但是乳糖會啟用細菌中的一些基因並導致相應的反應發生。
3. 感應態:在此狀態下,細菌可以感受到細菌產生的一些小分子訊號,例如已經存在的細菌群體在釋放一些分子時,周圍的細菌可以感受到這些分子的存在,並做出適當反應,例如產生一些互相運動的細胞結構。
農桿菌感受態主要有三類:1. 親感態:
這種狀態下,細菌可以感受到周圍的化學物質或環境的變化,並對其作出適當反應。例如隱悉備,當細菌感受到尋找到另外一種細菌即細菌群體形成之前,會釋放一種化學物質,這種化學物質就可以被其近距離的細菌感受到。2.
易感態:當細菌處於易灶毀感態時,它們可以感受到一類化合物叫做乳糖,雖然乳糖不是自身需要使用的營養物質,但是乳糖會啟用細菌中的一陸鄭些基因並導致相應的反應發生。3.
感應態:在此狀態下,細菌可以感受到細菌產生的一些小分子訊號,例如已經存在的細菌群體在釋放一些分子時,周圍的細菌可以感受到這些分子的存在,並做出適當反應,例如產生一些互相運動的細胞結構。
我還是有些不太明白,能否再詳細些?
農桿菌的親感態、易感態和感應態是三種不同的感受態狀態,具有以下不同之處:1. 親感態:
指細菌感受到周圍環境中諸如微山正生物、營養物等的化學物質,而對其產生作用。這種感受態有助於細菌找到合適的寄主並將其感染。2.
易感態:指細菌通過感受到營養物質乳糖,產生反應進而發出訊號。這種感受態有助於細菌調節自身代謝,使其在合適時機準確地利用可獲得的營養物。
3. 感應態:指細菌通過感受到細菌吵悔產生的分子訊號,使得細菌能夠行動和協調。
這種感受態有助於細菌形成群體公升唯正並協同作戰,以提高其生存和繁殖的成功率。因此,這三種感受態狀態都起到了關鍵的作用,使農桿菌能夠更好地適應其生存環境。
如何製備大腸桿菌感受態細胞
4樓:網友
(1)挑取大腸桿菌單菌落,接種於5 ml無抗生素的lb液體培養基中,37℃下振盪培養13h,至對數生長後期。將該菌懸液以1:50 的比例接種於100 ml lb 液體培養基中,37℃振盪培養2-3h至od600=。
2)在無菌條件下將培養液轉入離心管中,冰上放置10 min,使培養物冷卻至0℃,然後4℃,4000rpm離心10min;
3)棄去上清,倒置1 min,以便將培養液流盡;
4)用冰預冷的 mol/l的cacl2溶液10 ml輕輕懸浮細胞,充分混勻,冰上放置30 min後,4℃下4000rpm離心10min;
5)棄去上清,並倒置1 min,以便最後的痕量培養液流盡;
6)加入4 ml預冷含15%甘油的 mol/l的cacl2溶液,輕輕懸浮細胞,冰上放置幾分鐘,即成感受態細胞懸液;
7)感受態細胞100 μl分裝,貯存於-70 ℃儲存備用。
農桿菌轉化法中怎麼把目的基因匯入濃桿菌是用感受態細胞法嗎?然後這個濃桿菌轉化法就包括感受態細胞法嗎
5樓:爽朗的菜葉
目的基因是通過農桿菌匯入植物細胞的,所以叫農桿菌轉化法。
要通過農桿菌完成轉化,首先要將目的基因匯入農桿菌。用鈣離子處理農桿菌,使農桿菌成為感受態,容易吸收外界環境的dna,從而完成轉化。
將目的基因匯入農桿菌和將目的基因匯入植物細胞是兩個不同的過程,受體細胞不同,方法也不同。
總而言之,將目的基因匯入植物細胞,先要將目的基因匯入農桿菌,再通過農桿菌完成轉化。
大腸桿菌感受態細胞的製備方法步驟誰能介紹下!
6樓:南門素琴之歌
大腸桿菌感受態細胞的製備(cacl2法)
1)從新活化的。
dh5α菌平板上挑取一單菌落,接種於3~5mllb液體培養中,37℃振盪培養12h左右,直至對數生長期。將該菌懸液以1:100~1:50轉接於100ml
lb液體培養基中,37℃振盪擴大培養,當培養液開始出現混濁後,每隔20~30min測一次od600nm,至od600nm≤時停止培養;
2)每組取培養液3個2ml轉入2ml離心管中,在冰上冷卻20-30min,於4℃,4000r/min離心10min(從這一步開始,所有操作均在冰上進行,速度儘量快而穩);
3)倒淨上清培養液,用1ml冰冷的。
cacl2溶液輕輕懸浮細胞,冰浴;
詳細方法登陸生物幫瞭解下,
感受態細胞的製備·轉化·細胞轉染·菌種培養相關方法及原理
7樓:網友
製備(複製的~)
1.將凍存的菌種1:100接種於3ml的lb液體培養基中,37℃搖床過夜**培養。
2.取1ml活化菌種接種於100mllb培養基中,37℃搖床培養。
3.將菌種在冰上放置10minrpm下離心10min收集菌體。
4.棄上清,用事先冰浴的重新懸浮細胞,冰浴30min。
5.收集菌體,條件同上。
6.棄上清,在冰浴條件下加入溶液。
7.分裝儲存(40%甘油與感受態細胞1:1混合,使甘油的終濃度為20%)。
轉化。1 連線產物加入感受態中。
2 冰上放置30分鐘。
3 42° 90秒。
4 冰上2-5分鐘。
5 塗板~細胞轉染(這裡說的是脂質體轉染,以六孔板為例,如果是電轉或者病毒侵染的話再問我吧)
對於每乙個孔。
1 一管200ul opti+5ul lipofectin 靜置5分鐘。
2 一管200ul opti+4ug 質粒。
3 兩管混合 靜置20分鐘。
4 加入孔板中。
5 4-6小時後換液。
用鈣離子處理成為感受態細胞的轉化方法
原因 目的基因匯入植物細胞時,由於沒有經過鈣離子處理沒有變成感受態細胞,細胞的通透性小,目的基因難以進入細胞。感受態細胞主要原理 1 通過處理使細胞的通透性變大。2 使得細胞膜表面出現一些孔洞,便於外源基因或載體進入感受態細胞。3 由於細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。擴充套件資料 氯化鈣...
CaCl2製備感受態細胞轉化DNA時,低溫的目的是什麼 熱休
冰浴過程中,原來加在溶液中的鈣離子和細菌細胞膜結合,在低溫下形成液晶結構,這樣,在42度熱激下,這種液晶結構收縮,將細胞膜扯開孔道,使dna進入細菌細胞中。這就是原理。在0 4 cacl2低滲溶液中,細胞膨脹成球狀,轉化混合物中的dna形成抗dna酶的羥基 鈣磷酸複合物黏附於細胞表面,較低的溫度也降...
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含質粒,但沒有抗性,可以直接在無抗性的lb板上劃線。商用大腸桿菌dh5a感受態細胞,是否含有質粒?或者有沒有抗性?以大腸桿菌dh5a感受態細胞為宿主菌,如何將金黃色葡萄球菌tst基因成功植入pet30a載體 首先找到pet30a載體上的兩個酶切位點,然後確認你的tst基因裡面沒有這兩個位點,設計pc...