細菌分解代謝產物的檢測和鑑定是如何實現的

2021-03-19 18:19:11 字數 5295 閱讀 6493

1樓:永遠的鷹

代謝產物的話因不同種的細菌而異吧,如果只是簡單點的話,像樓上那樣檢驗二氧化碳還是酒精或乳酸就夠了,如果是不怎麼熟悉的菌種的話首先要查閱相關資料進行初步瞭解和判斷,再對其可能產物進行分別鑑定。例如瞭解到纖維素分解菌的產物可能是某種還原糖或非還原糖,然後再分別具體鑑定到底是什麼,產生了氣體的話也要檢驗。

簡單的鑑定大致就是這樣。

2樓:v血天使

收集氣體 通入澄清石灰水看看變混麼? 不變混就是酒精或乳酸 再用重鉻酸鉀檢驗

舉例說明細菌分解代謝產物在細菌鑑定中的意義?

3樓:匿名使用者

1、實驗原理

(1)細菌生化試驗

各種細菌所具有的酶系統不盡相同,對營養基質的分解能力也不一樣,因而代謝產物或多或少地各有區別,可供鑑別細菌之用。用生化試驗的方法檢測細菌對各種基質的代謝作用及其代謝產物,從而鑑別細菌的種屬,稱之為細菌的生化反應。

(2)糖(醇)類發酵試驗

不同的細菌含有發酵不同糖(醇)的酶,因而發酵糖(醇)的能力各不相同。其產生的代謝產物亦不相同,如有的產酸產氣,有的產酸不產氣。酸的產生可利用指示劑來判定。

在配製培養基時預先加入溟甲酚紫[p hs . 2 (黃色)一6 . 8 (紫色)] ,當發酵產酸時,可使培養基由紫色變為黃色。

氣體產生可由發酵管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來證明。

(3)甲基紅(methylred )試驗(該試驗簡稱mr 試驗)

很多細菌,如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸,丙酮酸再被分解,產生甲酸、乙酸、乳酸等,使培養基的ph 降低到4 . 2 以下,這時若加甲基紅指示劑呈現紅色。因甲基紅指示劑變色範圍是ph4 .

4 (紅色)一ph6 . 2 (黃色)。若某些細菌如產氣桿菌,分解葡萄糖產生丙酮酸,但很快將丙酮酸脫梭,轉化成醇等物,則培養基的ph 仍在6 .

2 以上,故此時加入甲基紅指示劑,呈現黃色。

(4)大分子物質代謝實驗.

靛基質(口引睬)試驗

某些細菌,如大腸桿菌,能分解蛋白質中的色氨酸,產生靛基質(叫睬),靛基質與對二甲基氨基苯甲醛結合,形成玫瑰色靛基質(紅色化合物)。

硫化氫試驗

某些細菌能分解含硫的氨基酸(肌氨酸、半肌氨酸等),產生硫化氫,硫化氫與培養基中的鉛鹽或鐵鹽,形成黑色沉澱硫化鉛或硫化鐵。為硫化氫試驗陽性,可藉以鑑別細菌。

明膠液化實驗

某些細菌具有膠原酶,使明膠被分解,失去凝固能力,呈現液體狀態,是為陽性。澱粉水解試驗(在紫外誘變中做,本實驗不做)

細菌對大分子的澱粉不能直接利用,須靠產生的胞外酶(澱粉酶)將澱粉水解為小分子糊精或進一步水解為葡萄糖(或麥芽糖),再被細菌吸收利用,細菌水解澱粉的過程可通過底物的變化來證明,即用碘測定不再產生藍色。

(5)有機酸鹽及氨鹽利用試驗

檸檬酸鹽利用試驗

檸檬酸鹽培養基系一綜合性培養基,其中檸檬酸鈉為碳的唯一**。而磷酸二氫按是氮的唯一**。有的細菌如產氣桿菌,能利用檸檬酸鈉為碳源,因此能在檸檬酸鹽培養基上生長,並分解檸檬酸鹽後產生碳酸鹽,使培養基變為鹼性。

此時培養基中的溟廖香草酚藍指示劑由綠色變為深藍色。不能利用檸檬酸鹽為碳源的細菌,在該培養基上不生長,培養基不變色。

2、實驗儀器,材料和用具

(1)實驗儀器

37oc 恆溫培養箱、20oc 恆溫培養箱(室溫代替)。

(2)微生物材料

大腸桿菌、變形桿菌、枯草桿菌、產氣桿菌這四種菌種的斜面各1 支。

(3)試劑

甲基紅試劑、v . p 試劑、叫噪試劑、格里斯試劑(硝酸鹽利用試驗)、盧戈氏碘液(澱粉水解試驗)

(4)實驗用具

試管:每份每個試驗2 根試驗,1 根對照,8 個試驗共27 根。

無菌乎皿:每份2 個

杜氏小管:每份6 個。

接種環、酒精燈、試管架、記號筆。

(5)培養基

葡萄糖發酵培養基和乳糖發酵培養基:何份各6 支試管,何支5 一10mi 培養基,滅菌。用於糖類發酵試驗。

葡萄糖蛋白陳水培養基:每份3 支試管,何支5 一10mi 培養基,滅菌。用於甲基紅和v . p 試驗。

胰蛋白水培養基:每份3 支何支5 一10mi 培養基,滅菌。用於叫睬試驗。

檸檬酸鐵錢或醋酸鉛的半固體培養基;每份3 支,每支5 一10ml 培養基,滅菌。用於硫化氫試驗。

營養明膠培養基:每份3 支,每支.5 一10ml 培養基、滅菌。用於明膠液化試驗。

澱粉培養基:每份2 個平皿,每平皿約20ml 培養基,滅菌後倒入平皿。用於澱粉水解試驗。

檸檬酸鈉培養基:每份3 支,每支5 一ioml 培養基,滅菌,做斜面。用於檸檬酸鹽利用試驗。

3、實驗步驟

(1)糖(醇)類發酵試驗

編號在各試管上分別標明發酵培養基名稱,所接種的菌名和組號,下同。

接種取葡萄糖發酵培養基3 支,按編號1 支接種大腸桿菌,另1 支接種普通變形桿菌,第3 支不接種,作為對照c 同樣取3 支乳糖發酵培養基,1 支接種大腸桿菌,1 支接科普通變形桿菌,第3 支不接種,作為對照。

將己接種好的培養基置37oc 溫箱中培養24h 。

觀察結果:被檢細菌若能發酵培養基中的糖時,則使培養基的ph 降低,這時培養基中的指示劑呈酸性反應(為黃色),若發酵培養基中的糖產酸產氣,則培養基不僅顯酸色反應,並且在培養基中倒置的小玻璃管(杜氏小管)中有氣體。氣體佔整個倒置小玻管的10 %以上。

若被檢細菌不分解培養基中的糖,則培養基不發生變化。

(2)甲基紅試驗(mr 試驗)

將大腸桿菌和產氣桿菌分別接種到葡萄糖蛋白陳水培養基中,37oc 培養48h ,加甲基紅指示劑數滴,觀察結果,呈現紅色者為陽性,呈現黃色者為陰性。

(3)伏一普二氏試驗(v . p .試驗)

將被檢菌接種到葡萄糖蛋白陳水培養基中,37oc 培養48h ,取出,加入40 % kolls 一10 滴,然後再加入等量的5 %。一蔡酚溶液,用力振盪,再放入37oc 溫箱中保溫巧一30min ,以加快反應速度。若培養物呈現紅色,為伏一普反應陽性。

(4)靛基質(口引噪)試驗將被檢菌接種到胰蛋白陳水培養基中,37oc 培養24h 一48h 後,沿試管壁滴加數滴叫睬試劑於培養物液麵,觀察結果。

出現紅色者為陽性,出現黃色者為陰性。

(5)硫化氫試驗:

將大腸桿菌和變形桿菌以接種針穿刺接種到醋酸鉛或檸檬酸鐵氨培養基中,37oc 培養24h ,觀察結果,若有黑色出現者為陽性。

(6)明膠液化試驗

取大腸桿菌和枯草桿菌的純培養物少許,以接種針分別穿刺接種到營養明膠培養基中,置20oc 培養5 一7 天。觀察明膠培養基液化情況。若被檢細菌20 oc 不易生長,可放3 7 oc 培養,但在此溫度下明膠培養基呈液狀,故觀察結果時,應將明膠培養基輕輕放入4oc 冰箱30min ,此時明膠又凝固。

若放置於冰箱30min 仍不凝固者,說明明膠被試驗細菌液化,是為陽性。

(7)澱粉水解試驗

將配製好的澱粉培養基冷卻到sooc 左右,以無菌操作製成平板。

用接種環取少許枯草桿菌劃線接種在平板的一邊,再取少許大腸桿菌劃線接種在平板的另一邊。置37oc 溫箱培養24h 。

將平皿取出,開啟皿蓋,滴加少量盧戈氏碘液於平板上,輕輕搖動平皿,使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍有無色透明圈出現,說明澱粉己被水解。透明圈的大小,說明該菌水解澱粉能力的大小。

(8)檸檬酸鹽利用試驗

取少量被檢菌接種到檸檬酸鹽培養基上,37oc 培養24h 後,觀察結果。培養基變深藍色者為陽性。培養基不變色,則繼續培養7 天,培養基仍不變色者為陰性。

其實意義不是很大,一般是根據《伯氏細菌手冊》看的,不過現在基本上都是用16s rna來鑑定,要精確一些。

細菌的分解代謝產物有哪些

4樓:月似當時

細菌除能分解糖和蛋白質外,對一些有機物和無機物也可分解利用。各種細菌產生的酶不同,其代謝的基質不同,代謝的產物也不一樣。

(1)對其他有機物的分解:如變形桿菌具有尿素酶,可以水解尿素,產生氨。乙型副傷寒沙門菌和變形桿菌都具有脫硫氫基作用,使含硫氨基酸(胱氨酸)分解成氨和h2s。

(2)對其他無機物的分解:產氣腸桿菌分解檸檬酸鹽生成碳酸鹽,並分解培養基中的銨鹽生成氨。細菌還原硝酸鹽為亞硝酸鹽,氨和氮氣的作用,稱為硝酸鹽還原作用。

擴充套件資料

有些細菌在生長髮育的後期,個體縮小,細胞壁增厚,形成芽孢。芽孢是細菌的休眠體,對不良環境有較強的抵抗能力。小而輕的芽孢還可以隨風四處飄散,落在適當環境中,又能萌發成為細菌。

細菌快速繁殖和形成芽孢的特性,使它們幾乎無處不在。

某些細菌處於不利的環境,或耗盡營養時,形成內生孢子,又稱芽孢,是對不良環境有強抵抗力的休眠體,由於芽孢在細菌細胞內形成,故常稱為內生孢子。

芽孢的生命力非常頑強,有些湖底沉積土中的芽孢桿菌經500-2023年後仍有活力,肉毒梭菌的芽孢在ph 7.0時能耐受100℃煮沸5-9.5小時。

細菌主要以無性二**方式繁殖(裂殖),即細菌生長到一定時期,在細胞中間逐漸形成橫隔,由一個母細胞**為兩個大小相等的子細胞。

細胞**是連續的過程,**中的兩個子細胞形成的同時,在子細胞的中間又形成橫隔,開始細菌的第二次**。有些細菌**後的子細胞分開,形成單個的菌體,有的則不分開,形成一定的排列方式,如鏈球菌、鏈桿菌等。

5樓:your大頭兵

細菌的代謝產物及意義

1.與致病性有關的代謝產物

熱原質 或稱致熱原,是細菌合成的一種物質,極微量注入人或動物體內即能引起發熱反應,故名熱原質。熱原質耐高熱,高壓蒸氣滅菌(121 ℃,20 min)不被破壞。在製備和使用生物製品、注射液、抗生素等過程中應嚴格無菌操作,防止細菌汙染,保證無熱原質存在。

毒素 毒素是病原菌在代謝過程中合成的對機體有毒害作用的物質,包括內毒素和外毒素。內毒素即革蘭陰性菌細胞壁的脂多糖,其毒性成分為脂質a,在菌體死亡崩解後釋放出來。外毒素是由革蘭陽性菌及少數革蘭陰性菌在生長代謝過程中釋放至菌體外的蛋白質,具有抗原性強、毒性強、作用特異性強的特點。

侵襲性酶 某些細菌可產生具有侵襲性的胞外酶,能損傷機體組織,促進細菌的侵襲、擴散,是細菌重要的致病物質。

2.與**有關的代謝產物

抗生素 某些微生物代謝過程中產生的一類能抑制或殺死其他微生物或腫瘤細胞的物質。

維生素 如人體腸道內的大腸埃希菌,能合成b族維生素和維生素k,可被人體吸收利用。

3.與鑑別細菌有關的代謝產物

色素 某些細菌能產生不同顏色的色素,有助於鑑別細菌。

細菌素 某些細菌產生的僅對近緣菌株有抗菌作用的蛋白質。抗菌範圍很窄且具有型特異性,現無**意義,多用於細菌分型和流行病學調查。

糖的分解產物 細菌分解糖可產生有機酸、醇類和氣體等。不同的細菌所含的酶類不同,代謝產物也不同,利用各種糖發酵試驗檢測細菌對糖的分解產物,可用於鑑別細菌。

蛋白質的分解產物 不同細菌分解蛋白質和氨基酸的能力不同,利用各種生化反應可以鑑別細菌的種類。

微生物代謝產物,微生物的糖類分解代謝產物有哪些

1 有h2o 和co2 無氧呼吸也會產生h2o 和co2 只不過沒有有氧呼吸那麼多。我是 樓上,乙醇發酵中是產生二氧化碳的。誠然,糖酵解產生乳酸這一反應不產生co2,但微生物在無氧發酵中,還有很多的脫羧過程。不要狹隘的理解微生物體內只進行糖酵解這一個生理過程。樓上不對吧?雖然說一般生物呼吸代謝出來的...

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常見的途徑 有 糖酵解途徑 emp tca迴圈途徑 ppp途徑 糖醛酸途徑 糖酵解途徑 emp 是有機體獲得化學能最原始的途徑,一切生物有機體都普遍存在的葡萄糖降解途徑。三羧酸迴圈 tca迴圈 在動植物 微生物細胞中普遍存在,這個途徑產生的能量最多,不僅是糖代謝的主要途徑。也是脂肪 蛋白質代謝的最終...

細菌產生的與致病性有關的代謝產物有哪些

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