1樓：微笑之普利西亞
因為此方法簡單易行,操作方便。
gst pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統的體外試驗技術,近年來越來越受到廣大學者的青睞。
其基本原理是將靶蛋白-gst（glutathione-s-transferase谷胱苷肽巰基轉移酶）融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當一種「誘餌蛋白」,目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的「捕獲蛋白」(目的蛋白),洗脫結合物後通過sds-page電泳分析,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應的目的蛋白,「誘餌蛋白」和「捕獲蛋白」均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統以及體外轉錄翻譯系統等方法獲得。
請教gst pull-down assay和免疫共沉澱的區別
2樓：飛鴻love巨集
gst pull-down一般指用一個帶gst標籤的重組蛋白，與目的蛋白進行孵育，最後用結合gst的beads拉下相互作用複合物。
免疫共沉澱一般是用某一蛋白的抗體，在細胞裂解液中與相應的蛋白結果，用protein a/g將抗原抗體複合物拉下，最後在拉下的複合物中檢測目的蛋白的實驗。
二者都是用於檢測蛋白相互作用的實驗。
區別是pull-down一般是驗證 體外 相互作用；免疫共沉澱一般用於檢測細胞水平的 體內 相互作用。
3樓：cofe_飛
兩者原理和操作上都有一定的區別，比如做gst pull down的蛋白要有標籤，但是做免疫共沉澱就用不到，但是做免疫共沉澱需要額外準備抗體。（當然gst蛋白也需要準備抗體，畢竟事後要做wb的）
另外兩者都可以測兩種已知蛋白是否有相互作用或利用已知蛋白去調未知蛋白。本質上沒什麼區別，根據自己的情況選擇吧。
最後一點要說的就是，co-ip比較好的一點，就是可以模擬體內互作的情況，結果更真實一點。
免疫共沉澱和gst pull down技術各有何優勢？
4樓：116貝貝愛
免疫共沉澱的話蛋白質是處於天然狀態，可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白複合體。
gst pull-down是將gst融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上，與溶液中的目的蛋白結合。可以用來確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間的新的相互作用。
一、免疫共沉澱是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用於研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
二、當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞記憶體在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose
beads上的蛋白質a的抗體免疫沉澱a蛋白，那麼與a蛋白在體內結合的蛋白質b也能一起沉澱下來。再通過蛋白變性分離，對b蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。
三、這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用於測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用於確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。
四、gst pull-down實驗是一個行之有效的驗證酵母雙雜交系統的體外試驗技術,近年來越來越受到廣大學者的青睞。其基本原理是將靶蛋白-gst（glutathione-s-transferase谷胱苷肽巰基轉移酶）融合蛋白親和固化在谷胱甘肽親和樹脂上,作為與目的蛋白親和的支撐物,充當一種「誘餌蛋白」。
五、目的蛋白溶液過柱,可從中捕獲與之相互作用的「捕獲蛋白」(目的蛋白),洗脫結合物後通過sds-page電泳分析,從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應的目的蛋白,「誘餌蛋白」和「捕獲蛋白」均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統以及體外轉錄翻譯系統等方法獲得。
免疫共沉澱和gst pull down技術各有何優勢
5樓：匿名使用者
都是用來研究蛋白質相互作用的技術
免疫共沉澱的話蛋白質是處於天然狀態，蛋白質的相互作用可以在天然狀態下進行，可以避免認為影響，還可以分離得到天然狀態下相互作用的蛋白複合體。
但是問題是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋樑作用；而且必須在實驗前**目的蛋白是什麼，以選擇最後檢測的抗體，如果抗體選錯了就沒有結果。
gst pull-down是將gst融合蛋白作為探針固化到凝膠柱上，與溶液中的目的蛋白結合。可以用來確定融合（或探針）蛋白與未知（或靶）蛋白間的新的相互作用，證實探針蛋白與已知蛋白質間可疑的相互作用。
但問題是這個方法可能會出現假陽性。也就是也許是因為電荷作用的影響造成的吸附，而不是生理性的相互作用。
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