基因表達的操作步驟,基因過表達的原理步驟和應用是什麼?

2021-03-19 18:20:05 字數 1711 閱讀 8038

1樓:

首先獲得要表達的目的基因,然後選擇合適的載體,把目的基因與載體連線到一起,然後再通過適當的條件進行誘導(可以原核表達或真核表達),最後進行檢測和鑑定

2樓:匿名使用者

dna在細胞核中轉錄為mrna,mrna在核糖體中翻譯為蛋白質

3樓:匿名使用者

一般來說是dna轉錄成相應的rna 然後核糖體沿著rna運動同時翻譯出多肽鏈 多肽鏈經過內建網 高爾基體加工成蛋白質

「基因過表達」的原理步驟和應用是什麼?

4樓:立港娜娜

基因過表達的基本原理是通過人工構建的方式在目的基因上游加入調控元件,使基因可以在人為控制的條件下實現大量轉錄和翻譯,從而實現基因產物的過表達。

基因過表達的步驟是:

1,構建克隆。將目的基因連線在特定的載體上,載體種類依據表達系統差異而不同。在載體上一般含有增強基因轉錄的promoter,不同系統中採用的promoter完全不同

2,將克隆匯入表達細胞中。在大腸桿菌,酵母和哺乳動物細胞中,構建的外源質粒直接匯入細胞即可,這個過程稱為轉化或轉染。對於昆蟲表達系統,構建的質粒還需要先轉座成為桿狀病毒基因組才能用於轉染。

基因過表達的應用:大腸桿菌表達系統,酵母表達系統,昆蟲表達系統,哺乳動物細胞表達系統和體外翻譯系統(無細胞體系)。

基因過表達跟沉默操作步驟一樣嗎

5樓:匿名使用者

顧名思義,基因過表達是將某個基因大量表達的過程。這個過程可以是在基因原本所在的細胞中,也可以是在其它表達系統中進行。其基本原理是通過人工構建的方式在目的基因上游加入調控元件,使基因可以在人為控制的條件下實現大量轉錄和翻譯,從而實現基因產物的過表達。

現在有很多成熟的表達系統用於基因過表達,常用的包括:大腸桿菌表達系統,酵母表達系統,昆蟲表達系統,哺乳動物細胞表達系統和體外翻譯系統(無細胞體系)。雖然這些系統各不相同,但過表達的基本步驟相似。

構建克隆。將目的基因連線在特定的載體上,載體種類依據表達系統差異而不同。在載體上一般含有增強基因轉錄的promoter,不同系統中採用的promoter完全不同。

將克隆匯入表達細胞中。在大腸桿菌,酵母和哺乳動物細胞中,構建的外源質粒直接匯入細胞即可,這個過程稱為轉化或轉染。對於昆蟲表達系統,構建的質粒還需要先轉座成為桿狀病毒基因組才能用於轉染。

基因的表達。在昆蟲和哺乳動物細胞體系中,轉染進入細胞內的外源基因在其上游強啟動子的作用下可以直接過量表達。在大腸桿菌系統中,需要加入額外的誘導劑(常用iptg)誘導表達,酵母系統中有的也需要誘導表達(例如甲醇誘導)。

體外翻譯系統不用細胞,常常在細胞提取物(模擬細胞內環境)中進行基因的過量轉錄和翻譯,其基本步驟中沒有上訴第二步。

基因過表達的目的一般有兩種,一是獲取大量的目的基因產物,二是研究目的基因產物的生物學功能。

過表達可以讓我們得到大量的目的基因產物(一般是蛋白質),用於研究或生產。比如x射線晶體學研究蛋白質三維結構首先就需要過量表達得到目的蛋白。發酵工程製備胰島素,taq酶等蛋白類產品都需要過表達。

為了研究某一個基因產物的功能,可以在體內(一般是在這個基因本來所在的細胞中)將這個基因過表達,檢測細胞的生理學變化。它和基因敲除是研究基因功能的兩個重要手段。

運用中心法則簡要說出基因的表達過程.

6樓:匿名使用者

dna→rna→蛋白質

基因晶片基因表達,基因晶片基因表達

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