基因如何克隆,基因克隆的基本步驟有哪些

2022-10-14 23:10:22 字數 1526 閱讀 7440

1樓:路西法之傲慢

直接提取基因,可以用pcr技術擴增

如果要匯入植物細胞中的話

一般會把那個基因連線到重組質粒上,然後匯入到農桿菌中,用農桿菌去侵染植物。叫農桿菌轉化法。

2樓:藍蝦

設計引物通過pcr對基因組dna進行擴增

怎樣克隆基因家族中的一個特定基因

基因克隆的基本步驟有哪些

3樓:莫彷徨

選擇目的基因,並設計相應引物;

用引物pcr擴增目的基因片段;

選擇合適(抗性標記、酶切位點等)的克隆載體(為了保真擴增),並將pcr片段連線入克隆載體中;(一般用taq酶的pcr產物在末尾會自帶一個a,可在solution 1作用下與兩端各帶一個t的線性t載體直接相連)

將連線產物轉化入感受態大腸桿菌,使之在含有抗生素的培養基上生長擴增;

從大腸桿菌中提取質粒(即前面的連線產物),酶切鑑定和測序鑑定均無誤後將目的基因片段切下並與新的表達載體連線,然後再次轉化入大腸桿菌中擴增,再提質粒,即得到想要的目的基因片段克隆.

基因克隆有哪些步驟,如何篩選陽性克隆

4樓:匿名使用者

簡單的說一下:

擴增目的基因,比如通過pcr的方法。

pcr擴增的序列可以通過酶切或者topo ta的方法插入到載體質粒。

轉染大腸桿菌

篩選陽性克隆一般常採用藍白克隆方法,就是在載體上,序列的插入位置本來是一個完整編碼β-gal這個酶的序列,如果不被破壞,產生的酶可以降解細菌培養盤上的底物,形成藍色產物。如果有目的序列插入,這個酶就不能表達,形成的克隆就是白色的。

挑取陽性克隆,測序確認無變異和方向後,擴增質粒,提純質粒。

基因克隆和dna克隆是一樣的嗎?步驟是怎樣的?

5樓:匿名使用者

兩個是一回事。基因克隆步驟:選查詢要克隆的基因序列,抽取rna,反轉錄,設計引物,rt—pcr,連線到表達載體,誘導表達。

6樓:匿名使用者

一個意思 就是把你的目的基因同過酶的作用,連線到質粒上(另一種基因,環狀),轉移到宿主中去。

怎樣克隆基因或是克隆基因的一般步驟是什麼?

7樓:匿名使用者

一般情況下有兩種bai方法:一du、反轉錄法:用已知zhi的單鏈mrna反轉錄出一條dao單鏈的dna,再用鹼基互補回配對原則合成雙鏈

答dna。

二、用已知的蛋白質的多肽鏈推測出單鏈mrna(一個氨基酸對應相應的密碼子)上鹼基的排列順序,再根據單鏈mrna上鹼基的排列順序推測出一條單鏈dna上鹼基的排列順序,再推測出雙鏈dna上鹼基的組成,進行人工合成(用pcr儀)。

8樓:何欣麗

pcr法

基因表達的操作步驟,基因過表達的原理步驟和應用是什麼?

首先獲得要表達的目的基因,然後選擇合適的載體,把目的基因與載體連線到一起,然後再通過適當的條件進行誘導 可以原核表達或真核表達 最後進行檢測和鑑定 dna在細胞核中轉錄為mrna,mrna在核糖體中翻譯為蛋白質 一般來說是dna轉錄成相應的rna 然後核糖體沿著rna運動同時翻譯出多肽鏈 多肽鏈經過...

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