1樓：匿名使用者
溶解曲線的意思是：當溫度高於擴增產物的tm值時，雙鏈產物變單鏈，熒光值因為這樣的變化而產生變化，根據這一原理，你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化，比如你用的是taqman探針，taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的taq酶剪下斷而產生的，那麼在只有溫度變化的情況下，是沒有熒光值變化的，自然就沒有溶解曲線了。但是假如你用的分子信標探針或者sybgreen燃料，情況就不同了。
rt-pcr裡的ct值到底代表什麼意思？
2樓：北京索萊寶科技****
閾值指指數增長期熒光訊號的臨界值，一般pcr儀會自動給出閾值，而ct指就是擴增曲線達到閾值時的迴圈圈數。
rt-pcr裡的ct值到底代表什麼意思
3樓：北京索萊寶科技****
閾值指指數增長期熒光訊號的臨界值，一般pcr儀會自動給出閾值，而ct指就是擴增曲線達到閾值時的迴圈圈數。
怎麼通過q-pcr的擴增曲線和溶解曲線來分析結果，如何通過曲線來判斷結果的好與壞？
4樓：匿名使用者
1、擴增曲線（如果做雙δct法）：
（1）擴增曲線必須是s型，有明顯的四個時期，且復孔的ct值儘量一致，相差不要超過0.5個ct值（上限是1個ct值）；
（2）同一個基因在不同濃度的相同模板下擴增，其相差的ct值為相差濃度倍數的2次開方。當然這是理論值；另外陰性對照不能有擴增（40個迴圈以後出ct值屬正常現象，也可算作沒有擴增）。
2、溶解曲線：
（1）溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線；
（2）一般sybr法的目的基因在80~90℃之間；
（3）出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因所致；
（4）基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
3、溶解曲線是為了驗證擴增產物特異性的，要是溶解曲線是單峰說明產物只有一條，結果較好；要是雙峰說明產物不特異，可能存在引物二聚體或非特異性擴增，有可能引物設計有問題。
5樓：匿名使用者
具體要看你做什麼實驗，模板和擴增的基因實怎樣的。
1、擴增曲線：一般來說如果你做雙δct法那麼你的擴增曲線必須是s型，有明顯的四個時期，且復孔的ct值儘量一致，相差不要超過0.5個ct值（上限是1個ct值）；同一個基因在不同濃度的相同模板下擴增，其相差的ct值為相差濃度倍數的2次開方。
比如同一種cdna5倍濃度稀釋，那麼同一種基因擴增的前提下，5倍濃度模板的ct值會比1倍濃度模板的ct值提前2.3個迴圈左右，以此類推，當然這是理論值；另外陰性對照不能有擴增（40個迴圈以後出ct值屬正常現象，也可算作沒有擴增）。
2、溶解曲線：溶解曲線是判斷擴增產物是否單一的曲線，顧名思義，其跟模板（或其濃度）沒有關係，擴增什麼基因就應該有其相對應的溶解曲線，類似於電泳。那麼你擴增幾種基因就應該有幾種對應的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之間），我說的是一般情況，這個跟擴增片段長短有關係。
出現其他峰就該考慮是否為引物二聚體（一般為60~75℃之間）視引物長度而定，而基因組dna汙染的峰會在90℃以後。出現引物二聚體可能是引物設計、引物加量等原因（也有可能是從加完反應液到上機開始pcr這之間的時間過長）所致；基因組dna那麼考慮設計跨內含子引物或者實驗之前做gdna的消除工作。而陰性對照有目的峰那可能就是模板汙染，注意實驗操作等避免模板汙染。
純手打，支援下。
6樓：匿名使用者
擴增曲線要是s形的，融解曲線要單峰。滿足這些條件結果才可靠
rtpcr中沒有溶解曲線的原因是什麼
你設定溶解曲線那一步驟了嗎?要是沒設,當然不會起峰。可能由於你的引物根本沒有把目的片段pcr出來,自然也就沒有峰。rt pcr中沒有溶解曲線的原因是什麼?ct值有的 溶解曲線的意思是 當溫度高於擴增產物的tm值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在...
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