1樓:阿魯巴星人
你設定溶解曲線那一步驟了嗎?要是沒設,當然不會起峰。
可能由於你的引物根本沒有把目的片段pcr出來,自然也就沒有峰。
rt-pcr中沒有溶解曲線的原因是什麼?(ct值有的)
2樓:匿名使用者
溶解曲線的意思是:當溫度高於擴增產物的tm值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化,比如你用的是taqman探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的taq酶剪下斷而產生的,那麼在只有溫度變化的情況下,是沒有熒光值變化的,自然就沒有溶解曲線了。但是假如你用的分子信標探針或者sybgreen燃料,情況就不同了。
rt-pcr融解曲線詳解
3樓:匿名使用者
融解曲線是熒光定copy量pcr儀出現後為了bai考察染料法結果的特異性du產生的。zhi大家使用熒光定量pcr的目的dao
(也是熒光定量pcr的宣稱優點)有快速、準確及無汙染,其中快速的前提之一是不用跑電泳就可以通過擴增曲線考察初始拷貝數的量;準確是因為電泳是終產物,而通過擴增曲線我們知道,擴增最後達到平臺期,這時不能真實反映未知樣品的初始濃度,通過實驗證明,擴增曲線的指數擴增期可以進行定量(ct值);無汙染是電泳需要開蓋操作,而熒光定量pcr通過擴增曲線就不需要跑電泳就可以定量了。融解曲線是由於染料法的特異性差,所以通過融解曲線考察擴增產物是否是目標產物,與電泳的其中的一個目的相同,但融解曲線畢竟是數學推導,並且結果中包含了儀器的誤差(熒光訊號中有系統誤差),不如電泳能反映更多的實際的資訊。所以實驗時,如果採用染料法,融解曲線較好的話,如果實驗條件不允許,可以不做電泳了,但如果融解曲線出現問題,藉助電泳分析是一個很好的手段(有時擴增曲線顯示沒有擴增,但有電泳結果,可能的原因是設定問題或者染料、探針本省或者量的問題),個人認為比融解曲線更可靠。
如果發文章,有融解曲線並且有電泳圖,就比較完美了。
rt-pcr的溶解曲線同一個樣3個孔tm值不在一起是什麼原因
4樓:可愛的袁寶
你設定溶解曲線那一步驟了嗎?要是沒設,當然不會起峰
可能由於你的引物根本沒有把目的片段pcr出來,自然也就沒有峰
定量pcr沒有檢測到ct值,引物溶解曲線高峰出現前的一段曲線有一部分在0.00以下 10
5樓:匿名使用者
沒有ct值怎麼還有溶解曲線?引物的溶解曲線?是引物二聚體吧?這曲線沒有任何價值啊?
怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線
6樓:匿名使用者
熒光定量pcr的溶解曲線理解:用syber green方法做完pcr後,用來判斷產物是否相對專一。應結束後,逐漸加溫。和syber
green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈,就不能在和syber
green結合。
一般每加溫一度,讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時,產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度,而縱座標是熒光訊號的變化,開始加熱,訊號變化不大,所以幾乎是平的。
接近tm時,突然變化加大,所以出現峰值。再升溫,產物全部解離,就又是一條直線了。如果有非特異性產物,在加熱過程中就會出現一些比較矮,寬的峰。
7樓:匿名使用者
這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作!
因為syby green染料是非特異的染料,只要有擴增,染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰,且出鋒位置是你的退火溫度,那麼這個是你的產物發出的熒光,實驗結果有效。
如果出現多鋒或退火溫度不對,那麼這個實驗結果是不可信的!你需要再次調整!
rtpcr中沒有溶解曲線的原因是什麼？ct值有的
溶解曲線的意思是 當溫度高於擴增產物的tm值時，雙鏈產物變單鏈，熒光值因為這樣的變化而產生變化，根據這一原理，你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化，比如你用的是taqman探針，taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的taq酶剪下斷而產生的，那麼在只有溫度變化的情況下，是...
溶解度曲線的意義，溶解度曲線意義怎麼說
表示同一種物質在不同溫度時的溶解度或溶解度隨溫度變化的情況 表示不同物質在同一溫度時的溶解度，可以比較同一溫度時，不同物質的溶解度的大小。若兩種物質的溶解度曲線相交，則在該溫度下兩種物質的溶解度相等 根據溶解度曲線可以確定從飽和溶液中析出晶體或進行混合物分離提純的方法 根據溶解度曲線能進行有關的計算...
怎麼解化學溶解度曲線圖的題,初三化學溶解度曲線圖的解題方法
溶解度曲線 1 溶解度曲線 由於固體物質的溶解度隨溫度變化而變化，隨溫度一定而一定，這種變化可以用溶解度曲線來表示。我們用縱座標表示溶解度，橫座標表示溫度，繪出固體物質的溶解度隨溫度變化的曲線，這種曲線叫做溶解度曲線。2 溶解度曲線的意義 表示同一種物質在不同溫度時的溶解度 表示不同物質在同一溫度時...