1樓：匿名使用者
2樓：敬軒
原理就是 dna的複製
過程三步 a、dna變性（90℃-95℃）：目的基因dna受熱變性，解鏈
b、 復性（55℃-65℃）：引物與單鏈互補結合c、延伸（70℃-75℃）：合成鏈在dna聚合酶作用下進行延伸
3樓：匿名使用者
dna變性，退貨，延伸，利用actin基因做對照，能看出目的基因的表達量，actin基因叫內參基因，他在任意組織和時間表達亮都是一樣的。
實時熒光定量pcr的原理
4樓：匿名使用者
熒光定量pcr原理：隨著pcr反應的進行，pcr反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針（bioghc elitefast sybr kit）和熒光染料（bioghsc super probe kit）
5樓：匿名使用者
所謂的實時熒光定量 pcr 就是 通過對 pcr 擴增反應中每一個迴圈產物熒光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時熒光定量 pcr 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著
pcr 反應的進行， pcr 反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
簡述定量pcr的原理和過程
6樓：世玉枝裘婷
半定量反轉錄－聚合酶鏈反應（semi-quantitative
reverse
transcription
andpolymerase
chain
reaction
,sqrt-pcr）是近年來常用的一種簡捷、特異的定量rna測定方法，通過mrna反轉錄成cdna，再進行pcr擴增，並測定pcr產物的數量，可以推測樣品中特異mrna的相對數量。以半定量rt-pcr為基礎建立起來的mrna含量測定技術，較含內標化的rt-pcr定量測定的mrna的方法更為簡便可行。
這種方法不另設『內標準',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量－效益關係和良好的重複性。
步驟：1.抽提rna，2.反轉錄獲得cdna，3.以cdna為模板做pcr
注意：步驟1，rna抽提質量一定要好，注意汙染。內參的選擇，常用的有βactin和gapdh倆中。
步驟3，半定量rt-pcr應該再兩管中進行，既內參和目的基因各一管，這樣便於控制，做圖的時候可以放在一各泳道里跑！指數期和平臺期一定要摸清楚！
7樓：井永芬暴茶
原理1;在含有插入性染料或特異性探針的體系中擴增目標序列.
2光學系統激發並檢測報告熒光
3報告熒光的強度與所擴增dna的量呈比例關係過程和普通pcr差不多，不過引物設計比較複雜，使用的儀器也不一樣，在對數期檢測。
8樓：管景明樸賦
過程其實和普通pcr一樣，只是定量一般會加熒光染料（或熒光探針），整個過程是被儀器監控的所以能夠實時的知道擴增的進度。最後根據標準曲線來定量的。
實時定量pcr基本原理如何？
9樓：匿名使用者
實時pcr（real—time polymerase chain reaction）又稱熒光定量pcr或taqman pcr，是美國pe公司（perkin elmer）於2023年研製出的一種新的核酸定量技術。該技術在常規pcr基礎上運用熒光能量傳遞（fluorescence resonance energy transfer，fret）技術，加入熒游標記探針，巧妙地把核算擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術結合在一起，藉助於熒光訊號來檢測pcr產物。一方面提高了靈敏度，另一方面還可以做到pcr每迴圈一次就收集一個資料，建立實時擴增曲線，準確地確定ct值，從而根據ct值確定起始dna的拷貝數，做到真正意義上的dna定量。
另外由於ct值是一個完全客觀的引數，ct值越小，模版dna的起始拷貝數越小。因此，利用ct值確定dna拷貝數實時pcr方法比普通終點定量方法更加準確。
熒光定量pcr的原理以及的結果如何分析
10樓：匿名使用者
不同探針有些許差別，但原理一樣。簡單說：就是在探針上加上熒光素，在taq聚合酶作用下合成帶有熒光素探針的片段，再給它激發光，釋放一光波，儀器檢測並分析。
至於結果：儀器有自動分析功能，會給出一個閾值線。閾值線與熒光曲線的交叉點就是ct值。根據ct值和你使用的試劑盒說明書來判讀結果。
定量pcr中CT值的定義,實時定量pcr的CT值在什麼範圍內算作合理
ct值 c代表cycle,copyt代表threshold,ct值的含義是 bai每個反應管內的熒du光訊號到達設定的域值時zhi所經歷的迴圈數 daopcr反應的前15個迴圈的熒光訊號作為熒光本底訊號,熒光域值的預設設定是3 15個迴圈的熒光訊號的標準偏差的10倍 每個反應管內的熒光訊號達到所設定...
多重pcr和多重熒光定量pcr的區別
正常啊，定量pcr很靈敏的，體系稍微變化就會誤差很大，更何況你這樣反應體系都不一樣。所以一般定量結果只是作為佐證，最好別太相信。你想做好，就儘量保證每個體系是一致的，最後結果趨勢是一致的就行了。多重pcr可以同時檢測多個基因，聽我師兄說前段時間他們實驗室用bioghsc kit同時設計了5條引物，逆...
熒光定量pcr擴增曲線開始有個下降的曲線
從你這個圖上看，這是非特異性的擴增。訊號非常弱，而且都超過40個迴圈還沒有訊號。之所以前面有下降，其實都是背景噪音訊號。你看縱座標的數值都非常的小。所以不是真正的擴增訊號，都是背景噪音干擾而已。沒有任何擴增產物。求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線 實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg 上...