1樓：南京金益柏生物科技****
常規pcr中，在擴增反應結束之後，我們一般通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析，無法對pcr擴增反應進行實時檢測，也無法對起始模板準確定量，而很多情況下，我們所感興趣的是起始模板量，如轉基因動植物中插入某種外源基因的拷貝數或者病人中某種病毒dna/rna的精確copy數等，如此，熒光定量pcr技術便應運而生。
1、熒光定量pcr概念
所謂定量pcr技術（real-time pcr），是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號累積實時監測整個pcr程序，最後通過特定數學原理對未知模板進行定量分析的方法
2、熒光定量pcr與普通pcr的主要區別
理論上pcr是一個指數增長的過程，但是實際的pcr擴增曲線並不是標準的指數曲線，而是s形曲線。這是因為隨著pcr迴圈的增多，擴增規模迅速增大，taq酶、dntp、引物，甚至dna模板等各種pcr要素逐漸不敷需求，pcr的效率越來越低，產物增長的速度就逐漸減緩。當所有的taq酶都被飽和以後，pcr就進入了平臺期。
由於各種環境因素的複雜相互作用，不同的pcr反應體系進入平臺期的時機和平臺期的高低都有很大變化，難以精確控制。所以，即使是96次pcr重複實驗，各種條件基本一致，所得結果有很大差異（如下圖），所以在實驗過程中我們不能根據最終pcr產物的量直接計算出起始dna拷貝數。
3．2熒光閾值
我們一般把熒光pcr的前15個迴圈訊號作為熒光本底訊號（baseline，基線期），即樣本的熒光背景值和陰性對照的熒光值，擴增的熒光訊號被熒光背景訊號所掩蓋。熒光閾值是在熒光擴增曲線上人為設定的一個值，它可以設定在熒光訊號指數擴增階段任意位置上，熒光域值的預設設定是3～15個迴圈的熒光訊號的標準偏差的10倍（機器自動設定）。我們在做熒光定量pcr實驗時，經常採用手動設定，手動設定的原則要大於樣本的熒光背景值和陰性對照的熒光最高值，同時要儘量選擇進入指數期的最初階段，真正的訊號是熒光訊號超過域值。
實時熒光定量pcr技術的原理什麼？
2樓：匿名使用者
所謂的實時熒光定量 pcr 就是 通過對 pcr 擴增反應中每一個迴圈產物熒光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時熒光定量 pcr 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著
pcr 反應的進行， pcr 反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
pcr和實時熒光定量pcr這兩種有什麼區別
3樓：
原理不同：熒光定量pcr實時監測與dna結合的熒光染料激發的熒光；普通pcr通過檢測插入dna中核算染料的量來測定pcr最終產物量,一般是紫外光.
反應要求：熒光定量對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp；普通定量可以擴增長點的片段.如果不需要檢測產物分子量大小,熒光定量可以不進行電泳就對產物進行定量分析,普通pcr必須電泳.
結果：熒光定量可以實現精確定量,普通pcr則不行.熒光定量體現可以看到整個擴增過程,可以看到擴增效率,溶解溫度,直接得到的標準曲線等,這些是普通pcr無法實現的.
如果還不清楚建議去丁香園等**逛逛,希望可以幫到你
4樓：汗耕順閔凰
熒光原位雜交和熒光定量pcr有什麼區別
實時熒光定量pcr技術，是指在pcr反應體系中加入熒光基團，利用熒光訊號積累實時監測整個pcr程序，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
pcr(聚合酶鏈式反應）是利用dna在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°c左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至dna聚合酶最適反應溫度（72°c左右），dna聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
恆溫pcr和實時熒光定量pcr的不同，是不同在實時熒光定量pcr的系統中加入了熒光染料（sybr
green
或taqman
探針等等）。以sybr
green為例，這種染料可以結合在雙鏈的dna上，當pcr不斷進行時，每一次退火生成的雙鏈dna也在增加，熒光染料結合也越多，熒光也越強。在機器中有一個探測熒光的探頭，可以定量檢測熒光的強度，轉換成數值。這樣就可以實時記錄反映體系中dna的反應情況。
熒光pcr更有優勢，因為熒光pcr靈敏度高於恆溫pcr，同樣**也高一些。
什麼是實時熒光定量pcr？有什麼作用？請詳細說明。
5樓：月光_傾城
好多生物工作做廣告做培訓噢。你怎麼不去看一下。
實時熒光定量pcr的原理
6樓：匿名使用者
熒光定量pcr原理：隨著pcr反應的進行，pcr反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針（bioghc elitefast sybr kit）和熒光染料（bioghsc super probe kit）
7樓：匿名使用者
所謂的實時熒光定量 pcr 就是 通過對 pcr 擴增反應中每一個迴圈產物熒光訊號的實時檢測從而實現對起始模板定量及定性的分析。其原理是在實時熒光定量 pcr 反應中，引入了一種熒光化學物質，隨著
pcr 反應的進行， pcr 反應產物不斷累計，熒光訊號強度也等比例增加。每經過一個迴圈，收集一個熒光強度訊號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
多重pcr和多重熒光定量pcr的區別
正常啊，定量pcr很靈敏的，體系稍微變化就會誤差很大，更何況你這樣反應體系都不一樣。所以一般定量結果只是作為佐證，最好別太相信。你想做好，就儘量保證每個體系是一致的，最後結果趨勢是一致的就行了。多重pcr可以同時檢測多個基因，聽我師兄說前段時間他們實驗室用bioghsc kit同時設計了5條引物，逆...
StepOnePlus實時熒光定量PCR儀怎麼設定融解曲線
根據曲線初步判斷，整個實驗設計還可以！你做相對定量嗎，將樣品結果與對照看看基因表達量分析就可以了！如果絕對定量，需要進一步實驗吧！請問 實時熒光定量pcr怎樣設定才能有溶解曲線？有一種可能是，在試驗開始的設定階段，需要為整個實驗設計出熔解曲線的程式，這個您可能忘記了。在設定反應程式時，在最後加一步 ...
求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線
實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg 上下，所以溶解曲線不必從40deg 開始，可以從65deg 開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解 目的片段長度？pcr反應條件？管家基因的溶解...