熒光定量pcr擴增曲線開始有個下降的曲線

1樓：匿名使用者

從你這個圖上看，這是非特異性的擴增。訊號非常弱，而且都超過40個迴圈還沒有訊號。

之所以前面有下降，其實都是背景噪音訊號。你看縱座標的數值都非常的小。所以不是真正的擴增訊號，都是背景噪音干擾而已。沒有任何擴增產物。

求助，熒光定量pcr擴增曲線和溶解曲線

2樓：抹不掉呀

實時pcr產物的tm值大小一般會在80deg;上下，所以溶解曲線不必從40deg;開始，可以從65deg;開始進行溶解曲線繪製，另外在產物之前出現的小峰，同時也在陰性對照中出現了，應該是引物二聚體或者是非特異的擴增。

3樓：真莉莉畢田

通過你的描述目前還有很多資訊不實很瞭解：目的片段長度？pcr反應條件？

管家基因的溶解曲線怎麼樣？做的什麼實驗？是否將產物跑了電泳，條帶怎麼樣？

你可以將上述問題整理一下在一些專業性較強的生物論壇發帖子讓其他大神幫你分析一下。比如丁香園、生物秀等等。

出現怪異的溶解曲線大部分都是機器設定或者反應體系的問題，建議：

1、將擴增產物跑一下電泳，看一下目的條帶亮不亮2、一般定量pcr擴增後目的片段的峰在80~90℃之間，反應條件確認一下設定是否有問題

3、適當增加模板量或者減少引物濃度。

4、用的是哪個公司的酶？問一下這個公司的技術支援

熒光定量pcr中擴增曲線能說明什麼問題

4樓：首暢郎凌雪

在熒光法定量pcr中溶解曲線直接表示了引物的特異性，如果是單一的峰，那麼我們要看的是tm值在**，通常情況下都是80---90之間，如果太小那可能擴增出來的不是你想要的片段就是引物二聚體，如果兩個峰那就說明出現了非特異性擴增

實時熒光定量pcr沒出現擴增曲線為什麼

5樓：匿名使用者

說明擴增失敗。常見原因如下：（1）定量試劑質量較差；（2）模板質量太差；（3）引物質量太差；（4）pcr擴增時反應程式的設定有問題。

熒光定量pcr中擴增曲線能說明什麼問題？

6樓：卡哇伊o0小櫻

7樓：匿名使用者

可以看出是否有雜合的基因片段

8樓：匿名使用者

說明模板的濃度。。。

怎麼理解熒光定量pcr的溶解曲線

9樓：匿名使用者

熒光定量pcr的溶解曲線理解：用syber green方法做完pcr後，用來判斷產物是否相對專一。應結束後，逐漸加溫。和syber

green分子結合的pcr產物隨溫度升高逐漸變為單鏈，就不能在和syber

green結合。

一般每加溫一度，讀一次訊號。當溫度到達pcr產物的tm時，產物解離一下增多。曲線的橫座標是溫度，而縱座標是熒光訊號的變化，開始加熱，訊號變化不大，所以幾乎是平的。

接近tm時，突然變化加大，所以出現峰值。再升溫，產物全部解離，就又是一條直線了。如果有非特異性產物，在加熱過程中就會出現一些比較矮，寬的峰。

10樓：匿名使用者

這個一般是用syby green作為熒光染料的時候需要做的工作！

因為syby green染料是非特異的染料，只要有擴增，染料就可以鑲嵌在雙鏈中發出熒光。我們做溶解曲線是為了觀察我們擴增發出熒光的片段是不是我們需要的產物。如果溶解曲線做出來只有單峰，且出鋒位置是你的退火溫度，那麼這個是你的產物發出的熒光，實驗結果有效。

如果出現多鋒或退火溫度不對，那麼這個實驗結果是不可信的！你需要再次調整！

熒光定量pcr中擴增曲線怎麼做

11樓：匿名使用者

怎麼做？加完反應液和樣品放在定量pcr儀的反應孔裡直接就出來了啊？你是想問原理，還是別的？