1樓：匿名使用者
最常見的就是藍白斑篩選，詳細的樓主可參考這個
方法很多，除藍白斑篩選外，像
菌落pcr驗證：詳見
從細菌裡提取質粒後雙酶切驗證：用構建重組質粒時的兩種限制性酶進行酶切，電泳，觀察條帶是否和重組之前，目的基因電泳時條帶所處的位置一致。
測序驗證：送測序公司
基因克隆中藍白斑篩選法篩選陽性克隆的原理. 30
2樓：匿名使用者
藍白斑篩選是bai
重組子篩選的一種du方法： 是根zhi據載體的遺傳特徵篩dao選重組子，如α回-互補、抗生素基因等。現答在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的dna的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacz）的調控序列和前146個氨基酸的編碼資訊。
在這個編碼區中插入了一個多克隆位點（mcs），它並不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶c端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。這樣，lacz基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。
由α-互補而產生的lacz+細菌在誘導劑iptg的作用下，在生色底物x-gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源dna插入到質粒的多克隆位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。
如用藍白斑篩選則經連線產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落。
什麼叫陽性克隆篩選法? 請打擊幫幫忙!! 50
3樓：明思道想
目的建立一抄個簡便、可靠的重組襲陽性克隆的篩選方法.方法應用擴增小鼠生精細胞
凋亡相關基因時使用的引物,以基因重組擴增後得到的菌落為模板,直接進行pcr擴增.結果在篩選的陽性菌落中可擴增到與小鼠凋亡相關基因片段大小一致的陽性條帶;以陽性克隆提取質粒進一步進行pcr和酶切鑑定及序列分析,證明結果正確.結論菌落pcr是一種簡便、快速、可靠、有效的篩選重組陽性克隆的方法.
基因克隆有哪些步驟，如何篩選陽性克隆
4樓：匿名使用者
簡單的說一下：
擴增目的基因，比如通過pcr的方法。
pcr擴增的序列可以通過酶切或者topo ta的方法插入到載體質粒。
轉染大腸桿菌
篩選陽性克隆一般常採用藍白克隆方法，就是在載體上，序列的插入位置本來是一個完整編碼β-gal這個酶的序列，如果不被破壞，產生的酶可以降解細菌培養盤上的底物，形成藍色產物。如果有目的序列插入，這個酶就不能表達，形成的克隆就是白色的。
挑取陽性克隆，測序確認無變異和方向後，擴增質粒，提純質粒。
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