1樓：匿名使用者
根據你接下來的實bai驗來du設計～標籤
一般gst his等～gst能有zhi效增加蛋白溶解度用於
dao純化～同時可以專用標籤屬抗體檢測你的融合蛋白～設計標籤的位置要根據蛋白構想來～不影響你的蛋白功能～活性位點 n端訊號肽等等～選擇在蛋白的n端c端或中間插入標籤～
質粒載體如何構建
2樓：單單love偉偉
首先需要一個表達載體，看你需要原核還是真核，看情況選擇，然後有獲得你需要的目的基因，在兩端加酶切位點，將目的基因與載體連線到一起後就完成了質粒載體的構建了。
3樓：匿名使用者
你的質粒載如果是克隆型的，那麼必須有：複製起始和終止位點、多克隆位點、標記位點、分子量小、易分離等特點。如果是表達型的則必須有：轉錄起始位點，也就是要有啟動子和終止子等。
4樓：匿名使用者
pcr 酶切 連線 轉化 塗板 搖菌 提質粒。。。。
質粒是如何構建的？ 100
構建質粒載體的大體步驟是什麼？
5樓：匿名使用者
（1）根據你已知的序列設計帶有酶切位點的引物。
（2）pcr，跑膠，看看你的目的條帶大小對不。
（3）條帶對的話再重新跑個大孔膠，然後切膠**。（具體步驟根據你們所用試劑盒上的說明書進行），切膠**後還需電泳，看你**後怎麼樣。
（4）拿著你的**液與你的ta載體進行連線（具體操作見載體試劑盒說明書）
（5）連線後要轉化進大腸桿菌感受態中。37℃ 200rpm 搖菌一個小時。
（6）之後塗布至固體培養基上。（培養基是帶有抗生素的，這個抗生素的選擇要根據你的載體來選）
（7）37℃倒置培養一夜
（8）第二天早上，挑取單菌落，進行菌落pcr，檢測是否為假陽性。
（9）pcr之後如果條帶正確，則搖菌，搖的就是你檢測之後的那個單菌落。
（10）可以直接拿菌落測序，或者提取質粒測序。（記住要儲存菌種）
（11）如果測序得到的序列確實為你最初設定的那個序列，則再搖你儲存的那個菌種。
（12）提取質粒，做酶切。酶切的體系要看你所用的酶。
（13）酶切後還是需要進行**。
（14）將**的片段與你已經酶切好的表達載體的片段連線。
（15）再轉化至大腸桿菌擴增。
（16）pcr檢菌，酶切檢菌。
（17）檢菌正確，則你的表達載體構建完成。
因為我不知道你是否要構建到表達載體中，還是構建到克隆載體就可以，所以後面說的不是很詳細，但是大體的步驟就是這樣，只要你會構建克隆載體了，後面的表達載體基本也沒有問題了，只是多下些功夫就可以了。
我上面說的都是很簡單的語言，只供參考，不能作為書面語。有什麼問題可以再交流。
很想知道質粒構建的詳細步驟？
6樓：匿名使用者
1. 通過pcr擴增目的基因片段
pcr要設計
引物，設計引物時要選擇合適的同源序列，根據質粒載體和基因序列要選擇合適的酶切位點，pcr的產物要純化。
2. 酶切
根據引物設計的酶切位點，分別對pcr產物和質粒載體進行酶切，酶切後的產物也要進行**
3. 連線
通過連線酶將酶切後的pcr產物和質粒載體進行連線4. 轉化
將連線產物轉化到受體菌中（一般為dh5a），塗板，培養過夜5. 挑取單克隆，並鑑定
挑去平板上的單克隆培養，可以通過pcr或者酶切初步鑑定陽性克隆，對初步鑑定出來的陽性克隆進行測序
7樓：匿名使用者
質粒的構建有很多方法，如果是pcr產物連線到t載體則使用t-a策略，如果是酶切連線剛需要t4連線酶進行連線。
你要是有天根全式金載體連線說明書就明白了。
質粒的載體構建
8樓：°迷島
pbr322質粒載體的構建過程可簡單地概括如下：
1、由於pbr322質粒的親本之一是pmb1質粒，故首先以pmb1為基礎，引入rldrd19質粒的tn3易位子，得到13.3kb的pmb3質粒；
2、pmb3的分子量顯然使得它不適合作為載體，所以要通過在ecori活性條件下的消化讓它大部分的無用片段失去，留下來的小片段的dna的黏性末端連線起來後就形成了pmb8質粒（2.6kb）；
3、此時，另外一種psc101質粒在ecori活性條件下消化產生了含有tetr抗性的dn**斷，這個片斷和pmb8整合在一起就形成了pmb9質粒（5.3kb）。此時pmb9為ampstetr表型；
4、pmb9已經初步具備載體的功能，為了讓它更加完善，我們要讓它具備amprtetr效能，即在pmb9上引入psf2124的tn3易位子，但tn3可以來也可以走，為了留住它，我們切去了tn3中表達轉位酶的基因，形成了pbr313質粒。
此後我們兵分兩路：一路把pbr313的psti位點除去，使之成為ampstetr表型的pbr318質粒；
5、；另一路把pbr313的ecorⅱ的位點切除，使之成為amprtets表形的pbr320質粒。
由此我們的到了兩種功能互補的質粒，這樣我們只要將他們雜交就可以得到一種接近全能的載體質粒了，這就是pbr322。
質粒的構建過程
構建質粒載體的原則
9樓：匿名使用者
1、根據基因操作的工作要求。
2、符合理想載體的必備條件。
3、選擇合適的親本質粒提供運輸載體。
4、儘量簡化構建程式。
shrna質粒載體的構建？
10樓：匿名使用者
根據 已發表的braf基因序列,設計合成3條braf特異性的shrna編碼序列(其中一條shrna特異性針對黑專素瘤中最常見的braf v599e錯義突變屬設計)和一條與人基因組無同源性的陰性對照shrna編碼序列。將退火後的雙鏈shrna編碼序列重組於pgenesil-1質粒中,進行雙酶切和測序鑑定。結果雙酶切顯示shrna編碼序列被成功插入pgenesil-1質粒中,測序結果證實插入片斷與設計序列完全一致。
結論所設計的shrna編碼序列被正確插入質粒骨架,成功構建了braf基因序列特異性的shrna質粒載體。 參考**on http://www.
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a 質粒為來小型環狀dna分子，存在於自細胞核外或擬核外的細胞質基質中，a正確 b 細菌的基因大多數在擬核中，少數在擬核外的質粒中，b錯誤 c 病毒中沒有質粒，c錯誤 d 質粒是基因工程中的重要工具之一，但不是工具酶，d錯誤 故選 a 質粒是基因工程中最常用的運載體，下列與質粒有關的敘述正確的是 a...
重組質粒構建的注意事項重組質粒構建一個DNA為什麼要接入兩個不同的載體？
重組質粒構建是常用的分子生物學手段，其實只是最基本的方法，一般一個星期同時構建三二個組質粒是沒有問題的。在國內先進的實驗中，也大都是由實驗員搞定。但是其中還是有些基本的技巧需要掌握。在這裡將我的心得分享於大家，這也是我本人幾年來一線工作時的經驗積累，以期能為谷友提供借鑑，讓大家在實驗中少走彎路。所涉...
請問有設麼關於質粒構建 引物設計的文獻可以看嗎？要入門的那種
入門的話bai 最好不要看文du獻吧 因為文獻中的都是zhi比較深dao的 是在基礎之上後版人的研究 你想學的權話 建議看看基因工程原理 基因克隆和dna分析方面的書籍 那些是比較基礎的 只有把基礎的東西弄明白了 你才能看懂文獻 我現在也是在學習。請問有設麼關於質粒構建 引物設計的文獻可以看嗎 質粒...