關於小分子蛋白的western blot問題,實驗時的膠濃度

2021-04-21 10:19:30 字數 997 閱讀 4790

1樓:糟油酒丸

我最小bai也只做過十幾kd的。但是根據原

du理呢zhi主要有以下注dao意事項:

1。回當然是膠的濃度。9kda的話要適

答當增大,15-20%應該差不多吧。如果實在不行還能考慮用gradient gel。

2。二是轉膜緩衝液,內要含20%甲醇,新鮮配製,反覆使用的話注意甲醇會蒸發掉。如果連續使用的話兩三次應該還可以。

甲醇一是能夠洗掉跑膠時泡透了的sds(sds使蛋白帶負電,方便移動),二是幫助蛋白固定到膜上面。它同時有收縮膠的孔徑的***,但對小分子無影響。

3。三是膜的孔徑。很多常規的膜孔徑為0.

45um。你如果做小分子,17kd以下都跑掉了,那你應該試試0.2um孔徑的膜。

有一個小訣竅是轉膜時疊兩張膜一起轉,如果小分子蛋白跑過了前面一張膜,那總還有可能被後面一張膜抓到。

4。四是轉膜時間。小分子的話就不要過夜轉,採取100v一小時應該就可以了,注意降溫。

2樓:匿名使用者

不知道你說的tricine膠是什麼配方 先把跑膠和轉膜時間都縮短點看看唄 反正我之前做過的一個大概10kd的 確實得換另一種膠的配方

3樓:匿名使用者

invitrogen預製膠,別自己配了,不好控制。

4樓:枝基長靜晨

一般濃縮

膠抄為80v,這樣可以達到較好的濃縮效果,當條帶達到分離膠時,可以調到220v,這樣時間快點,做wb時蛋白降解較少。轉膜時一般為100v,轉膜時間要根據蛋白大小確定,130kd蛋白分子較大,最好時間長點,不過太長也不好,蛋白轉透過膜的,大約要1個半小時吧。希望採納.....

western blot實驗中轉膜時濾紙和膜的大小有什麼要求

5樓:義翹神州加油

一般膜比膠略大,周圍留些地方用於標記、鉗夾…

如果是溼轉的話膜和膠的大小沒有關係;半乾轉才有更多要求。

下列說法中,正確的是A分子內脫去小分子

a 分子內脫去一個bai 小分子的反應可du以是羧 zhi基和醇羥基發生酯化反dao應,回不是答消去反應,故a錯誤 b 苯中混有的苯酚,加入濃溴水苯酚生成的三溴苯酚易溶於苯,根本不會有沉澱生成,同時溴單質溶於苯中,故b錯誤 c 滲析是分離溶液和膠體的方法 膠體是一種較穩定的分散系,可用滲析法從膠體中...

問個分子勢能的問題關於分子勢能的問題。

不是的,因該是在一定範圍內是正確的,超出極限範圍後,引力變動極其微小,勢能就變小 所以是先變大,後變小,注意不要拿重力勢能做比較,因為重力是保持不變的,而這裡的引力是變小的 分子力隨分子間距離的增大而減小 完全正確 因為由分子力圖象和分子勢能圖象清楚知道 分子力在平衡位置,即r0處為零,而分子勢能此...

有關於準分子近視鐳射手術的問題,關於準分子鐳射手術的一些問題

人體是一個整體,人體是一個活體,作為整體他是一個相對平衡體,而每個區域性也是一個相 對平衡狀態。鐳射 眼睛是對區域性進行干擾,破壞他原來的平衡狀態建立新的平衡,有暫時的 療效,如果患者的身體本身剛好在從陰虛轉向陽虛的時候,那麼他的療效就可以持久。而如果患 者一直在陰虛狀態,甚至陰虛的情況日益嚴重,那...