1樓：漂亮的人間仙境
bca法測蛋白濃氏悄扮度時，樣品不溶解時按照以下方法解決操作。
bca 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法，其測定範圍是10－2000ug/ml，是比lowry 法更優越的專用於檢測總蛋白質含量的產品。
bca 蛋白定量測定方法：（96孔板）
1、配製bca 工作液： 根據標準品和樣品數量，按50 體積試劑a，1 體積試劑b 配製適量bca 工作液，充分混勻。
2、將蛋白標準品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微公升加到96 孔板的蛋白標準品孔中，加滅菌雙蒸水補足到10 微公升；取10 微公升待測樣品加入96 孔板。每個測定要做2-3 個殲灶平行。
3、向帶測樣品孔和蛋白標準品孔中加入200 微公升bca工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻。
溫浴30min。冷取至室溫。
5、酶標儀562nm 波長下測定吸光度。
6、製作標準曲線，從標準曲線中求出樣品濃度。
bca 蛋白定量測定操作注運山意事項：
1、反應顏色的深淺除了與樣品的蛋白質濃度相關外，還與反應的溫度有關。如果樣品的濃度較高（>50μg/ml），反應溫度一般採用37 度。如果樣品蛋白質的濃度較低（<50μg），反應的溫度為60℃，該溫度下，色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化，大大提高檢測靈敏度。
2、該方法檢測的蛋白質濃度範圍20μg-500μg/ml；當蛋白濃度＜20ug/ml 時，推薦60℃溫浴，並將蛋白液：工作液的比例調至1：8 進行測定（增強法）可以檢測到5ug/ml。
試劑a 和b 在室溫的穩定期至少1 年以上。標準蛋白液儲存在－20℃,短期則4℃儲存。
2樓：白羊白開水水水
根據樣品數量，按50體積bca試劑a加1體積bca試劑b（50:1）配製適量bca工作液，充分混勻。bca工作液室溫24小時內穩定。
2. 完全溶解蛋白標準品，取10微公升稀釋至100微公升 ，使終濃度為。蛋白樣品在什麼溶液中，標準品也巧弊宜用什麼溶液稀釋。但槐辯是為了簡便起見，也可以用或pbs稀釋標準品。
3. 將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20微公升加到96孔板的標準品孔中，加標準品稀釋液補足到20微公升。
4. 加適當體積樣品到96孔板的樣品空中，加標準品稀釋液到20微公升。 5. 各孔鉛寬缺加入200微公升bca工作液，37℃放置30分鐘。
注：也可以在室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。bca法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。
並且顯色反應會因溫度公升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。
6. 測定a562，540-595nm之間的波長也可接受。根據標準曲線計算出蛋白濃度。
混勻的問題，可以在引數中選擇快速**，30s就可以了做的好的話可以達到4個九。
事先配好各個濃度的bsa標準品，step 1
a液和b液按 50：1混合，（比如你要測2個樣品，可以是6個標準曲線點 0，，，1mg/ml，加上2個樣品，也就是8個孔，做平行就是16孔，那麼取a液取16*，b液取64ul 混合就ok了）
step2每孔加200ul混合液，然後標準曲線孔加入25ul標準品 ，樣品稀釋到合適的比例，也加入25ul（如果圖省事的話，比如也可以加1ul樣品，再加24ul水補齊，加樣的時候可能不會太準）
step337度孵育30min step4
測 od 565，附近也行。
3樓：帳號已登出
如果樣鏈搜畢品不能溶解，可以嘗試使用加熱技術或者電泳棚芹技術。也可以重新配製樣品濃度，採用容量法或者義網法來測量蛋漏粗白質的濃度。
bca法測蛋白濃度會有哪些誤差
4樓：網友
bca法是衡量蛋白質濃度的一種方法，但是在實際操作中可能會渣爛產生多種誤差。
1. 操作誤差：不正確的試劑使用、不正確的攪拌、沉澱殘留以及操作的時間和溫度等因素都可能影響測量結果的準確性。
2. 反應性差異：不同的蛋白質對bca試劑的反應性可能存在差異，這可能會導搭梁嫌致一些蛋白質表現出較低的吸收值，從而導致偏差。
3. 干擾物質：某些抗生素、膽固醇、紅細胞裂解物等物質都可能對測量結果造成干擾，從而導致測量誤差。
4. 蛋白質分子構象：蛋白質的空間構象可能會影響bca試劑的反應性，從而導致測量誤差。
5. 其他因素：例如樣品的清潔程度、ph值、離子強度等因素也可能對測量結果產生影響。
因此，在進行bca法測量蛋白質濃度時，需要注意操作知手規範、控制干擾物質、選擇合適的標準曲線等措施來減小誤差。
影響bca蛋白濃度測定因素
5樓：妖媚的倩倩
bca方法是一種用於測定蛋白質濃度的方法，基於其與copper（ⅱ）離子的化學反應形成物質的吸光度。以下是可能影響bca測定蛋白質濃度的因素：
1. 樣品的干擾：如果樣品清潔不夠或者存在其他雜質，可能會干擾化學反應，導致測定結果不準確。
2. ph值：根據bca法原理，將猜告滑copper（ⅱ）離子還原為copper（ⅰ）離子需要正確的ph值。同時，樣品的ph值也會影響反應的效率。
3. 還原劑濃度：還原劑的濃度過高或過低都可能影響反應的效果。一般情況下，還原劑的濃度應在合適的範圍內。
4. 離心：在新增還原劑之後，樣品需要進行離心，以使沉澱沉澱到底部。如果離心時間過短或者轉速過低，可能會影響分析結果。
5. 讀數時機：對於bca法來說，在確定反應完成之後讀數非常重要。如果沒有在正確的時間讀取吸光度，可能會導致結果偏差。
6. 其他因素：其他因素可能包括不同**商提供穗臘的試劑和試友啟管的批次變化、溫度等。
bca法測蛋白濃度原理
6樓：清風拂來
bca蛋白濃度檢測是乙個實驗，是根據吸光液念值可以推算出蛋白濃度。鹼性條件下，蛋白將cu2+還原為cu+， cu+與bca試劑形成紫顏色的絡合物，兩分子bca螯合乙個cu+。將該水溶性複合物在562nm處的吸收值，與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的埋弊濃度。
常用濃度的去垢劑sds，triton x-100，tween不影響檢測結果，但受螯合劑(edta，egta)、還原劑（彎埋族dtt，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用bradford蛋白濃度測定試劑盒。
簡介。二價銅離子在鹼性的條件下，可以被蛋白質還原成一價銅離子，一價銅離子和獨特的bca solution a（含有bca）相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的bca螯合乙個銅離子，形成紫色的反應複合物。
該水溶性的複合物在562nm處顯示強烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛範圍內有良好的線性關係，因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
實驗試劑。1) bca試劑的配製。
試劑a，1l：分別稱取10g bca (1%)，20g na2co3·h2o(2%)，na2c4h4o6·2h2o(，4g naoh ( nahco3( 加水至1l，用naoh或固體nahco3調節ph值至。
試劑b，50ml：取2g cuso4·5h2o (4%)，加蒸餾水至50ml。
bca試劑：取50份試劑a與1份試劑b混合均勻。此試劑可穩定一週。
2)標準蛋白質溶液：稱取牛血清白蛋白，溶於蒸餾水中並定容至100ml，製成5mg/ml的溶液。用時稀釋十倍。
bca法測定蛋白濃度結果偏大原因?
7樓：信必鑫服務平臺
bca法測蛋白濃度超過量程肯定不準確的超過量程一般就是是超過了標準曲線。
的最高點。雙縮脲法是第乙個用比色法測定蛋白質濃度的方法，硫銨。
不干擾顯色， cu2+與蛋白質的肽鍵，以及酪氨酸殘基絡合，形成紫藍色絡合物，此物在540nm波長處有最大吸收。雙縮脲法常用於含量的蛋白質溶液測定。
bca蛋白濃度檢測的實驗操作
8樓：通暢且舒心的小福音
繪製標準曲線：
取96孔酶標板，按下表加入試劑。 管號 1 2 3 4 5 6 7 8 標準蛋白溶液（μl）蒸餾水（μl）
bca試劑（μl）
蛋白質濃度（mg/ml） 0
上述試劑加完後，準確吸取20μl樣品溶液於酶標孔中，加入bca試劑200μl，輕搖，於37℃保溫30-60min，冷卻至室溫後，以空白為對照，在酶標儀上590nm處比色，以牛血清白蛋白含量為橫座標，以吸光值為縱座標，繪製標準曲線。以標準曲線空白為對照，根據樣品的吸光值從標準曲線上查出樣品的蛋白質含量。
檢測蛋白時標定後鹽酸濃度是多少呢
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