1樓：tdtdtd的家
1. 細胞密度。
一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。
2. 細胞狀態。
這點非常關鍵，很多時候傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞讓虧腔毒性，應儘量使用適度傳代的細胞系，並在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。
還有，儘量選擇無支原體汙染的細胞，支原體汙染是肉眼看不到的，可用支原體檢測試劑盒進行檢測，確保無支原體汙染。
3. 細胞種類。
不同細胞種類的細胞在做轉染時所需坦衫要的轉空好染體系是不同的，不能一種體系用在所有型別細胞的轉染實驗。
4. dna純度。
在製備高純度dna時，還需要對dna進行內毒素的去除，內毒素的存在會造成細胞毒性，嚴重影響轉染效率，現在市面上有很多去除內毒素的dna純化試劑盒可供選擇。
5. 轉染試劑。
脂質體試劑的毒性大，儘量選用脂質體的轉染試劑，如entranster試劑；另外，在大規模使用前，需進行轉染試劑和核酸最優比例的摸索。
2樓：婷庭詞
lo2細胞轉染效率是指將外源分子lo2細胞匯入真核細的技術的效率。
請教，關於lipo2000轉染效率低下的原因**
3樓：植朵
脂質體的轉染毒性是最大的，很明顯，那麼多的細胞死亡是由於轉染的細胞毒性導致的。對於這一點我有兩個建議，乙個是減少dna的用量，我一般做轉染，對於任何細胞，只要是12孔板，一般都是用1ugdna，這個量絕對夠了。,因為質粒轉染進入細胞的本質，和病毒感染沒區別，質粒的各種元件會從宿主細胞內搶奪細胞機器大量開始轉錄翻譯你的目的蛋白，在這個過程中會產生大量的沒有正確摺疊蛋白，這些異常摺疊蛋白進一步引起er stress導致細胞凋亡。
因此你用dna太多，本身就有細胞毒性。另外就是脂質體本身的毒性。事實上，對於293系的細胞系，最好用的是pei這種東西。
毒性小，轉染效率高，一般對293系列的細胞系可以輕易達到80%。polyscience有粉末買，買回來後直接在分子純度的水裡配置成1ug/ul的溶液，和你的質粒按照1ug dna/6ug pei對293進行轉染。
而且直接使用自制的pei非常便宜，在293上遠比商品化的脂質體要好。
另外，如果你們實驗室確實錢多，不怕花錢，建議你取用promega的fugenhd,那個轉染效率比脂質體更好，而且毒性小，至於**。。。也更高。。。
另外，你說漂浮的細胞有表到gfp，那個不一定是真的gfp，很多時候。
如何提高細胞的轉染效率
4樓：爵帝倵士
可以考慮在以下角度進行轉染實驗的優化： 細胞狀態與密度； 轉染試劑的型別、用量； dna的品質、用量； 轉染複合物的品質、作用細胞的時間長度。
如何鑑定細胞的轉染效率?
5樓：網友
通常是帶上乙個報告基因，比如綠色螢光蛋白。
然後在鏡下觀察看發光的和不發光的細胞比。
6樓：不哭de寶貝
在細胞轉染48h後，將各組細胞置於倒置螢光顯微鏡下觀察各實驗綠螢光蛋白的表達情況。
lo2細胞 可以轉染帶標籤的質粒嗎
7樓：匿名使用者
轉染細胞的質粒最好是去內毒素的，純度較高的質粒。在這個前提下，濃度越高越好。
質粒轉染肺癌細胞，轉染效率一般能有多少？
8樓：匿名使用者
應該還有優化的潛力的，我不知道你用的什麼轉染試劑。轉染效率本身和你用的轉染試劑有很大的關係，建議你先找來集中不同的轉染試劑，用venusc1或者是venusn1作報告質粒，找到最適合你的細胞的試劑，然後在用這個試劑，按照不同的dna和轉染試劑的比值來優化。我們在轉染細胞之前一般是檢測8種不同的轉染試劑，找到效率最高的那一種，然後再進一步優化。
至於用qpcr,你的這個mirna如果是細胞內源的，那就沒有問題。
轉染效率與表達量的區別
9樓：帳號已登出
轉染培消效率是轉染時的成功率，表達量是蛋白質的量。
1、當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可配辯知以取得較高的轉染效率，過低或過高都會影響轉染效果。
2、表達灶旁量是當某基因的長度較長時，匹配到該基因的reads數目也應該越多。
如何用流式細胞儀檢測轉染細胞的效率？
10樓：網友
陰性對照源最好用轉染無gfp載體的bai
細胞，因為轉染可能du會改變細胞的zhi自發螢光本地確保陰dao性對照和實驗細胞的濃度相同，具體多少倒是無所謂，不要太稀釋就好。
上機前，用細胞濾網過濾掉大塊未消化的雜質。
不要固定，gfp固定後螢光強度會下降。
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