1樓：匿名使用者
目的基因的獲得
一,逆轉錄法
逆轉錄法是先分離純化目的基因的mrna,再反轉錄成cdna,然後進行cdna的克隆表達.
1,mrna的純化
mrna的特點:3'末端含有一多聚腺苷酸組成的末端.
方法:親和層析法
2,cdna第一鏈的合成
一般 mrna都帶有3'-polya,所以可以用寡聚dt作為引物,在逆轉錄酶的催化下,開始cdna鏈的合成.
用放射性探針法檢測.
3,cdna第二鏈的合成
以cdna第一鏈為模板合成第二鏈.
4,cdna克隆
用於cdna克隆的載體有兩類:質粒dna和噬菌體.又將其分為表達型載體和非表達型載體.選用表達型載體可以增加目的基因的篩選方法,有利於目的基因的篩選.
cdn**段與載體的連線通常採用下面方法:
加同聚尾連線:在載體和cdna的3'末端加上互補的同型多聚酶序列.
人工接頭連線:所謂人工接頭是指用人工合成的,連線在目的基因兩端的含有某些限制酶切點的寡核苷酸片斷.
5,將重組體匯入宿主細胞
6, cdna文庫的鑑定
7,目的cdna克隆的分離和鑑定
(1)核酸探針雜交法
(2)免疫反應鑑定法
逆轉錄-聚合酶反應法.該方法是mrna經逆轉錄合成cdna第一鏈,不需再合成第二鏈,而是在特異引物的協助下,用pcr法進行擴增,特異地合成目的cdna鏈,用於重組,克隆.
二,化學合成法
前提:較小的蛋白質或多肽的編碼基因,必須知道目的基因的核苷酸排列順序,或知道目的蛋白質的氨基酸順序,再按相應的密碼子推匯出dna的鹼基序列.
操作:見書
限制:一,不能合成太長的基因.
二,人工合成基因時,遺傳密碼的簡併會為選擇密碼子帶來很大的困難.
三,費用高
基因表達
基因表達是指結構基因在生物體中的轉錄,翻譯以及所有加工過程.
基因表達研究是指外源基因在某種細胞中的表達活動,即剪下下一個外源基因片斷,拼接到另一個基因表達體系中,使其能獲得既有原生物活性又可高產的表達產物.
一,宿主細胞的選擇
宿主細胞應滿足的要求:
分類:第一類為原核細胞,如大腸桿菌等;第二類為真核細胞,如酵母等.
1,原核細胞
(1)大腸桿菌:目前採用最多的原核表達體系.
(2)枯草芽孢桿菌
(3)鏈黴菌
2,真核細胞
(1)酵母:釀酒酵母應用廣泛.
(2)絲狀真菌
(3)哺乳動物細胞
二,大腸桿菌中的基因表達
1,載體
表達載體必須具備的條件:
(1)載體能夠獨立的複製
(2)具有靈活的克隆位點和方便的篩選標記
(3)具有很強的啟動子
(4)具有阻遏子
(5)有很強的終止子
(6)有翻譯的起始訊號
常用的表達載體:
(1)pbv220系統
(2)pet系統
2,影響目的基因在大腸桿菌中表達的因素
(1)外源基因的拷貝數
(2)外源基因的表達效率
①啟動子的強弱
②核糖體結合位點
③sd序列和起始密碼子atg的間距
④密碼子組成
(3)表達產物的穩定性
(4)細胞的代謝負荷
(5)工程菌的培養條件
3,真核基因在大腸桿菌中的表達形式
(1)以融合蛋白的表達形式表達藥物基因
由一段短的原核多肽和真核蛋白結合在一起的蛋白質,稱為融合蛋白.
(2)以非融合蛋白的形式表達藥物基因
(3)分泌型表達蛋白藥物基因
三,酵母中的基因表達
1,載體
(1)載體的複製序列 包括yep類,yrp類,yrp類和yip類.
(2)克隆載體 由於從大腸桿菌中製備質粒比從酵母中容易,所以酵母質粒的加工和製備大部分是通過大腸桿菌進行的.
(3)表達載體 包括普通表達載體和精確表達載體.
2,影響目的基因在酵母菌中表達的因素
(1)外源基因的拷貝數
(2)外源基因的表達效率 主要與啟動子,分泌訊號和終止序列有關.
(3)外源蛋白的糖基化
(4)宿主菌株的影響 表達用的酵母宿主菌應具備①菌體生長力強.②菌體內蛋白酶要較弱.③菌株效能穩定.④ 分泌能力強.
四,動物細胞中的基因表達
基因工程藥品的優點是
2樓：
答案c點撥：基因工程藥品利用轉基因的工程菌等生產藥物，生產效率高。
基因工程有什麼優點
3樓：傷感美
目前世界許多國家將生物
技術，資訊科技和新材料技術作為三大重中之重技術，而生物技術可以分為傳統生物技術，工業生物發酵技術和現代生物技術。現在人們常說的生物技術實際上就是現代生物技術。現代生物技術包括基因工程、蛋白質工程、細胞工程、酶工程和發酵工程等五大工程技術。
其中基因工程技術是現代生物技術的核心技術。
既然基因工程技術是如此之重要，那麼什麼是基因工程呢？基因工程（ge***ic engineering）是指在基因水平上，採用與工程設計十分類似的方法，按照人類的需要進行設計，然後按設計方案建立出具有某種新的性狀的生物新品系，並能使之穩定地遺傳給後代。根據這個定義，基因工程明顯地既具有理學的特點，同時也具有工程學的特點。
「基因」這個名稱已在多處提到，那麼基因又是什麼呢？根據國內外的教科書和權威辭典上的解釋加以綜合，「基因」（gene）應定義為：基因是一段可以編碼具有某種生物學功能物質的核苷酸序列。
基因工程的核心技術是dna的重組技術，也就是基因克隆技術。重組，顧名思義，就是重新組合，即利用供體生物的遺傳物質，或人工合成的基因，經過體外或離體的限制酶切割後與適當的載體連線起來形成重組dna分子，然後在將重組dna分子匯入到受體細胞或受體生物構建轉基因生物，該種生物就可以按人類事先設計好的藍圖表現出另外一種生物的某種性狀。比如前面已提到的用動物來生產人的乳鐵蛋白，抗凝血酶和白蛋白。
除dna重組技術外，基因工程還應包括基因的表達技術，基因的突變技術，基因的匯入技術等。有關這些方面的技術將在以後相應的章節中予以介紹。
由於基因工程是在分子水平上進行操作，最終是為了創造出人們所需要的新品種，因而它可以突破物種間的遺傳障礙，大跨度的超越物種間的不親和性。比如在基因工程中最常使用的大腸桿菌，它是一種原核生物，但它卻能大量表達來自於人類的某些基因。例如各種人的多肽生長因子基因就可用大腸桿菌來生產。
如果用常規的育種技術來做同一項工作，那麼成功的機會應為零。因此，科學家們可以利用基因工程實現人類的各種物種改良的願望。
因為現在生活在地球上的各種生物都是經過長期的生物進化演變而來，雖然不能說它們都很能適應現在的生態環境，但至少可以說它們基本上都能適應當前的生態環境。這也就是說，每種生物體內或細胞內都處於精巧的調節控制和平衡之中。當用基因工程方法引入一段外源基因片段後，原有的平衡可能被打破，有可能導致細胞內的生物學功能發生紊亂，最後有可能導致細胞生長緩慢乃至細胞死亡。
很顯然，開展基因工程研究的目的既要使細胞象往常一樣正常生長，又要使細胞產生甚至大量產生人類所需要的外源基因表達產物。
科技或科學技術實際上是科學和技術兩個名稱構成的，它們是兩個既有聯絡又有區別的概念。科學主要是指發現自然界的規律，建立各種與自然界規律相適應的理論；而技術則是指在探索自然規律時所使用的一些方法。一些新的科學發現或新理論的建立，會導致一場技術革命，新技術新方法的建立又會推動新的自然規律的發現，因此，兩者是相互促進的。
從70年代起逐步建立起來的基因工程技術，使基因或一些具有特殊功能的dn**段的分離變得十分容易。這些基因或特殊dn**段的一級結構（即它們的核苷酸序列）的測定也是十分容易的，由基因的核苷酸序列去推測蛋白質的氨基酸殘基的序列也變得輕易而舉。利用計算機技術可以很容易的對推測出來的蛋白質進行高階結構的分析，可以對來自不同生物種類的基因序列進行同源性分析。
所有這些方法或技術的廣泛使用，不僅大大地推動了分子生物學的迅猛發展，而且也大大推動了生命科學各個分支領域的迅速發展。因此，基因工程技術的第一個重要應用領域就是大大的推動了科學理論研究的發展。
由於基因工程是從遺傳物質基礎上對原有的生物（常常稱之為受體生物）進行改造，經過改造的生物就會按照研究者的意願獲得某種（些）新的基因，從而使該生物獲得某些新的遺傳性狀。這種性狀可以用人的肉眼直接觀察到，也可能是通過某些反應或儀器間接觀察到。這種受體生物可能是微生物，植物或動物，因而它會涉及到許多生產行業。
基因工程技術幾乎涉及到人類的生存所必需的各個行業。比如將一個具有殺蟲效果的基因轉移到棉花、水稻等農作物種中，這些轉基因作物就有了抗蟲能力，因此基因工程被應用到農業領域；要是把抗蟲基因轉移到楊樹、松樹等樹木中，基因工程就被應用到林業領域；要是把生物激素基因轉移到支物中去，這就與漁業和畜牧業有關了；如果利用微生物或動物細胞來生產多肽藥物，那麼基因工程就可以應用到醫學領域。總之一句話，基因工程應用範圍將是十分廣泛的。
4樓：獨初雪冉笛
這樣的答案也是可以的
基因工程的有點主要體現在：目的性強，育種週期短，可克服遠緣雜交不親和障礙。
基因工程的工具的本質是什麼,基因工程三種工具原理
基因工程的工具有限制酶 dna連線酶和運載體。限制酶和dna連線酶的本質是蛋白質，常用的運載體是質粒，本質是dna。基因工程三種工具原理 基因工程 ge ic engineering 又稱基因拼接技術和dna重組技術，是以分子遺傳學為理論基礎，以分子生物學和微生物學的現代方法為手段，將不同 的基因按...
基因工程運載體，基因工程常用運載體是什麼
最常用的運載體是質粒 有些來自原核生物 有些來自酵母菌 真核生物 是一種小型環狀dna分子 運載體也可以是滅活的動植物病毒或者是噬菌體 最常用的運載體是質粒 來自原核生物 是一種環狀dna分子 運載體也可以是滅活的動植物病毒或者是噬菌體 基因工程常用運載體是什麼 質粒，噬菌體等東西。常用的載體有質粒...
回答有關基因工程的問題 （1）構建基因工程表達載體時，用不同
1 用限制bai酶切割dna後，可du能產生黏性末端，也可zhi能產dao生平口末端 若要版在限制酶基因工權程中，往往採用同種限制酶切割目的基因和質粒以產生相同的黏性末端，再用dna連線酶使其直接進行連線 2 rna聚合酶識別和結合的部位是啟動子 將目的基因匯入微生物細胞時，常用ca2 處理微生物細...