southern的雜交溫度怎麼算

2021-03-19 18:18:58 字數 1238 閱讀 3968

1樓:美麗的染染

核酸雜交方法是一種

分子生物學的標準技術,用於檢測dna或rna分子的特定序列(靶序列).經典的核酸雜交方法是將dna或rna先轉移並固定到硝酸纖維素或尼龍膜上,與其互補的單鏈dna或rna探針用放射性或非放射性標記,在膜上雜交時,探針通過氫鍵與其互補的靶序列結合,洗去未結合的遊離探針後,經放射自顯影或顯色反應檢測特異結合的探針.經典的核算雜交方法主要包括:

dna印跡雜交(southernblot)rna印跡雜交(northernblot)以及斑點雜交和原位雜交:1、dna印跡雜交(dnablothybridization)——有兩種核酸印跡法:將dna或rna溶液直接點樣於硝酸纖維素膜或尼龍膜上(斑點或狹線印跡)經瓊脂糖凝膠電泳將片段的dna或rna轉移到膜上(southern和northern印跡法).

dna在電泳前先用限制性內切酶消化.2、rna印跡雜交(rnablothybridization):rna印跡雜交是一種檢測已固定在濾膜上的總rna或mrna特定靶序列的技術.

3、斑點雜交將少量核酸樣品點樣在硝酸纖維素濾膜上,80℃烘烤後可牢固地固定在膜上,再用探針進行雜交.尼龍膜,特別是聚偏氟乙烯(pvdf)與dna結合力更高,堅韌、易操作.點樣可手工,也可用手工點樣品.

檢測可用放射性探針自顯影或非放射性探針顯色.可用於dna或rna分析.4、原位雜交在保持細胞形態條件下,進行細胞內雜交,顯影或顯色.

可用於dna或rna分析.熒光原位雜交(fish)進行染色體dna分析可用於生物學研究的許多領域以及臨床細胞遺傳學研究.其主要優點是不僅可以在細胞**的中期,而且可在**間期核中診斷染色體的變化.

廣義的核酸雜交就是指非同源的核酸分子間的復性(氫鍵結合)過程.因此可以說,目前的基因檢測技術,除了質普法外都或多或少的涉及了核酸雜交原理.如pcr的引物復性過程、基因晶片的雜交檢測過程、基因測序的引物復性過程以及各種snp檢測方法等等.

原位雜交 與 southern 雜交的區別~

2樓:匿名使用者

將標記的核酸探針與細胞或

組織中的核酸進行雜交,稱為原位雜交.

southern印跡雜交是進行基因組dna特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的dn**段,將膠上的dna變性並在原位將單鏈dn**段轉移至尼龍膜或其他固相支援物上,經幹烤或者紫外線照射固定,再與相對應結構的標記探針進行雜交,用放射自顯影或酶反應顯色,從而檢測特定dna分子的含量.

即前者是在組織中直接雜交,後者是提取出來再雜交

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