如何用elisa方法測定蛋白的結合常數

2021-05-31 16:57:12 字數 1604 閱讀 9433

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臨床elisa測定現通常為採用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式,測定操作非常簡單,一般涉及到標本的收集儲存、試劑準備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結果判斷和結果報告及解釋等方面,其中任一步驟的不當都會影響測定結果,且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。現分述如下。 一.

臨床標本的收集和儲存

如何用標準曲線法測定物質含量

2樓:長春北方化工灌裝裝置股份****

以蘆丁為例,其他物質測定方式雷同

儀器與試劑

1.儀器紫外-可見分光光度計;量瓶、移液管、吸量管。

2.試劑亞硝酸鈉,硝酸鋁,氫氧化鈉,乙醇(均為分析純),5%亞硝酸鈉溶液,10%硝酸鋁溶液,1mol/l氫氧化鈉溶液,30%乙醇溶液,蘆丁對照品,蘆丁(原料藥)。

實驗內容與步驟

1.對照品溶液的製備精密稱取在120℃減壓乾燥至恆重的蘆丁對照品100mg,置100ml量瓶中,加甲醇70ml,置水浴上微熱使溶解,放冷,加甲醇至刻度,搖勻。精密吸取10ml,置100ml量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得(每1ml中含無水蘆丁0.1mg)。

2.標準曲線的製備精密量取對照品溶液(o.1mg/ml)o.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,分別置於10ml量瓶中,各加30%乙醇使成5.0ml,各精密加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml,充分搖勻,放置6分鐘。各精密加入10%硝酸鋁溶液0.3ml,充分搖勻,放置6分鐘。各加1lmol/l氫氧化鈉溶液4.0ml,用蒸餾水稀釋至刻度,充分搖勻,放置15分鐘,用分光光度計,在510nm波長處測定吸光度。

以吸光度為縱座標,濃度為橫座標,繪製標準曲線。

3.試樣測定精密量取蘆丁試樣溶液(0.1mg/ml)3.0ml,置10ml量瓶中,按標準曲線製備項下自「各加30%乙醇使成5.0ml。「起依法操作直至測定出樣品的吸光度。

資料處理

1.根據測得的對照品的資料,繪製a—c標準曲線或計算迴歸方程。

2.根據測得的試樣的資料,從標準曲線上讀出或由迴歸方程計算出試樣溶液中蘆丁的重量(rag),按下式計算:

求助elisa測定抗體效價方法

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求助elisa測定抗體效價方法

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我用的是間接elisa,以下copy自我的畢業**:

將抗原用包被液稀釋至約10 ?g/ml;分別將陽性血清和陰性血清用tbs倍比稀釋,稀釋梯度從1:200,1:

400至1:204800,二抗用的是hrp標記的羊抗兔igg(1:5000稀釋) 。

酶標儀測定450nm處各個孔的吸光度(a450),計算陽性血清與陰性血清的吸光度之比(p/n),當p/n<1.5時為陰性,當p/n≥1.5而<2.

1為可疑,當p/n≥2.1為陽性,將p/n≥2.1時所對應的抗體最高稀釋倍數作為抗體的效價。

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