1樓：楊風遊
現在全基因組測序用鳥槍法，把所有dna打碎成短片段，測出所有片段的序列再用回超級計算機進行拼答接。
你說的是老方法，先構建大的長片段文庫，這些長片段互相重疊，能涵蓋全部基因組，即所謂的骨架scaffold。然後在對文庫裡每一個克隆進行亞克隆，應該還進行亞亞克隆，得到可以直接測序的短片段克隆，即所謂的可以測序得到reads的克隆。每個reads的序列拼接起來，逐級拼接，最後得出每一個長片段克隆的序列，最後進行長片段克隆的拼接，得到每一條染色體的序列。
實際上老方法就是分級克隆，再拼接，鳥槍法就是直接得到短片段，不經過克隆，對短片段直接測序、拼接。人類基因組計劃最初使用老方法，後來一個公司使用了鳥槍法，最後兩種方法同時完成。
已知部分基因序列,如何獲得全長基因？ 10
2樓：小木魚柔柔
如果是單鏈。可根據鹼基互補配對原則
如果知道其編碼的氨基酸序列，找到密碼子，再根據rna逆轉錄得，只是這樣不唯一
不過我在懷疑，這是不是一道高中題
好像條件不足
什麼是基因二代測序？
3樓：二凡的kiki妍
第二代測序為高通量測序，採用微珠或高密度晶片邊合成邊測序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次獲得數g資料，相對與第三代，都仍然需要擴增的方法放大訊號，擴增後再檢測。
第一代測序技術的主要特點是測序讀長可達1000bp，準確性高達99.999%，但其測序成本高，通量低等方面的缺點，嚴重影響了其真正大規模的應用。因而第一代測序技術並不是最理想的測序方法。
經過不斷的技術開發和改進，以roche公司的454技術、illumina公司的solexa，hiseq技術和abi公司的solid技術為標記的第二代測序技術誕生了。
第二代測序技術大大降低了測序成本的同時，還大幅提高了測序速度，並且保持了高準確性，以前完成一個人類基因組的測序需要3年時間，而使用二代測序技術則僅僅需要1周，但在序列讀長方面比起第一代測序技術則要短很多。
1）測序文庫的構建（library construction）
首先準備基因組（雖然測序公司要求樣品量要達到200ng，但是gnome analyzer系統所需的樣品量可低至100ng,能應用在很多樣品有限的實驗中），然後將dna隨機片段化成幾百鹼基或更短的小片段，並在兩頭加上特定的接頭（adaptor）。如果是轉錄組測序，則文庫的構建要相對麻煩些，rn**段化之後需反轉成cdna，然後加上接頭，或者先將rna反轉成cdna，然後再片段化並加上接頭。片段的大小（insert size）對於後面的資料分析有影響，可根據需要來選擇。
對於基因組測序來說，通常會選擇幾種不同的insert size，以便在組裝（assembly）的時候獲得更多的資訊。
2）錨定橋接（su***ce attachment and bridge amplification）
solexa測序的反應在叫做flow cell的玻璃管中進行，flow cell又被細分成8個lane，每個lane的內表面有無數的被固定的單連結頭。上述步驟得到的帶接頭的dna 片段變性成單鏈後與測序通道上的接頭引物結合形成橋狀結構，以供後續的預擴增使用。
3）預擴增（denaturation and complete amplification）
新增未標記的dntp 和普通taq 酶進行固相橋式pcr 擴增，單鏈橋型待測片段被擴增成為雙鏈橋型片段。通過變性，釋放出互補的單鏈，錨定到附近的固相表面。通過不斷迴圈，將會在flow cell 的固相表面上獲得上百萬條成簇分佈的雙鏈待測片段。
4）單鹼基延伸測序（single base extension and sequencing）
在測序的flow cell中加入四種熒游標記的dntp 、dna聚合酶以及接頭引物進行擴增，在每一個測序簇延伸互補鏈時，每加入一個被熒游標記的dntp就能釋放出相對應的熒光，測序儀通過捕獲熒光訊號，並通過計算機軟體將光訊號轉化為測序峰，從而獲得待測片段的序列資訊。從熒光訊號獲取待測片段的序列資訊的過程叫做base calling，illumina公司base calling所用的軟體是illumina』s genome analyzer sequencing control software and pipeline analysis software。讀長會受到多個引起訊號衰減的因素所影響，如熒游標記的不完全切割。
隨著讀長的增加，錯誤率也會隨之上升。
5）資料分析（data analyzing）
這一步嚴格來講不能算作測序操作流程的一部分，但是隻有通過這一步前面的工作才顯得有意義。測序得到的原始資料是長度只有幾十個鹼基的序列，要通過生物資訊學工具將這些短的序列組裝成長的contigs甚至是整個基因組的框架，或者把這些序列比對到已有的基因組或者相近物種基因組序列上，並進一步分析得到有生物學意義的結果。
4樓：讚的都帥
即第二代dna測序技術。
dna測序(dna sequencing)作為一種重要的實驗技術，在生物學研究中有著廣泛的應用。早在dna雙螺旋結構(watson and crick,1953)被發現後不久就有人報道過dna測序技術，但是當時的操作流程複雜，沒能形成規模。隨後在2023年sanger發明了具有里程碑意義的末端終止測序法，同年a.
m.maxam和w.gilbert發明了化學降解法。
sanger法因為既簡便又快速，並經過後續的不斷改良，成為了迄今為止dna測序的主流。
然而隨著科學的發展，傳統的sanger測序已經不能完全滿足研究的需要，對模式生物進行基因組重測序以及對一些非模式生物的基因組測序，都需要費用更低、通量更高、速度更快的測序技術，第二代測序技術(next-generation sequencing)應運而生。
這三個技術平臺各有優點，454 flx的測序片段比較長，高質量的讀長(read)能達到400bp;solexa測序價效比最高，不僅機器的售價比其他兩種低，而且執行成本也低，在資料量相同的情況下，成本只有454測序的1/10;solid測序的準確度高，原始鹼基資料的準確度大於99.94%，而在15x覆蓋率時的準確度可以達到99.999%，是目前第二代測序技術中準確度最高的。
基因測序是一種新型基因檢測技術，能夠從血液或唾液中分析測定基因全序列，**罹患多種疾病的可能性，個體的行為特徵及行為合理。基因測序技術能鎖定個人病變基因，提前預防和**。
基因測序相關產品和技術已由實驗室研究演變到臨床使用，可以說基因測序技術，是下一個改變世界的技術
5樓：匿名使用者
二代測序：將基因組dna打碎成約100-200個鹼基的小片段，在片段的兩個末端加上接頭 ( adapter )。將dn**段變成單鏈後通過接頭與晶片表面的引物鹼基互補而使一端被固定在晶片上。
另外一端隨機和附近的另外一個引物互補，也被固定住，形成橋狀結構。通過30輪擴增反應，每個單分子被擴增大約1000 倍，成為單克隆的dna簇，隨後將dna 簇線性化。在下一步合成反應中，加入改造過的dna聚合酶和帶有4種熒游標記的dntp。
在dna合成時，每一個核苷酸加到引物末端時都會釋放出焦磷酸鹽，激發生物發光蛋白髮出熒光。用鐳射掃描反應板表面，在讀取每條模板序列第一輪反應所聚合上去的核苷酸種類後，將這些熒光基團化學切割，恢復3』端黏性，隨後新增第二個核苷酸。如此重複直到每條模板序列都完全被聚合為雙鏈。
這樣，統計每輪收集到的熒光訊號結果， 就可以得知每個模板dn**段的序列。（中源-協-和-基-因）
6樓：dotaer嘯塵
全基因組重測序（whole genome sequencing)）是利用高通量測序平臺對已知基因組序列物種的不同個體或群體的基因組進行重測序，並在此基礎上對個體或群體進行差異性分析。
針對染色體大規模結構變異引起的遺傳疾病，利用低覆蓋全基因組測序結合高效的計算分析手段即可解決 。同時，利用低覆蓋全基因組測序技術，還可以對大規模人群連鎖、關聯進行研究。極少數遺傳疾病由編碼蛋白質區域以外的小變異造成。
這類變異只能使用高覆蓋度全基因組測序檢測。euler使用改進的建庫技術進行全基因組測序，提高覆蓋度、均一性、轉化速率等重要指標。通過自主研發的資訊分析管線，全面分析可能的遺傳變異。
案例分析
臨床案例---地中海貧血症
收樣要求
● 樣本型別：外周血，血漿，ffpe。
● 抗凝劑：枸櫞酸鈉或edta，不能用肝素。
● 採用常規edta抗凝採血管採集的靜脈血≥6ml，可在4℃下暫時儲存及運轉，應當自離體後8小時內完成血漿分離。
● 採用專用血漿儲存管（如streck管）採集的靜脈血≥6ml，可在室溫下暫時儲存及運轉，應當自離體後72小時內完成血漿分離。
● 分離的血漿樣本≥2ml，直接儲存於-80°c 冰箱，在乾冰冷鏈狀態下暫時儲存及運轉。
用plink 做gwas分析，如何去除具有兩個等位基因的位點
7樓：眼睛心裡青
人類基因組計劃（humangenomeproject，簡稱hgp）hgp的研究內容hgp的主要任務是人類的dna測序，包括下圖所示的四張譜圖，此外還有測序技術、人類基因組序列變異、功能基因組技術、比較基因組學、社會、法律、倫理研究、生物資訊學和計算生物學、教育培訓等目的。1、遺傳圖譜（geneticmap）又稱連鎖圖譜(linkagemap)，它是以具有遺傳多型性（在一個遺傳位點上具有一個以上的等位基因，在群體中的出現頻率皆高於1%）的遺傳標記為「路標」，以遺傳學距離（在減數**事件中兩個位點之間進行交換、重組的百分率，1%的重組率稱為1cm）為圖距的基因**。遺傳圖譜的建立為基因識別和完成基因定位創造了條件。
意義：6000多個遺傳標記已經能夠把人的基因組分成6000多個區域，使得連鎖分析法可以找到某一致病的或表現型的基因與某一標記鄰近（緊密連鎖）的證據，這樣可把這一基因定位於這一已知區域，再對基因進行分離和研究。對於疾病而言，找基因和分析基因是個關鍵。
2、物理圖譜（physicalmap）物理圖譜是指有關構成基因組的全部基因的排列和間距的資訊，它是通過對構成基因組的dna分子進行測定而繪製的。繪製物理圖譜的目的是把有關基因的遺傳資訊及其在每條染色體上的相對位置線性而系統地排列出來。dna物理圖譜是指dna鏈的限制性酶切片段的排列順序，即酶切片段在dna鏈上的定位。
dna是很大的分子，由限制酶產生的用於測序反應的dn**段只是其中的極小部分，這些片段在dna鏈中所處的位置關係是應該首先解決的問題，故dna物理圖譜是順序測定的基礎,也可理解為指導dna測序的藍圖。廣義地說，dna測序從物理圖譜製作開始，它是測序工作的第一步。製作dna物理圖譜的方法有多種，這裡選擇一種常用的簡便方法——標記片段的部分酶解法，來說明圖譜製作原理。
3、序列圖譜隨著遺傳圖譜和物理圖譜的完成，測序就成為重中之重的工作。dna序列分析技術是一個包括製備dn**段化及鹼基分析、dna資訊翻譯的多階段的過程。通過測序得到基因組的序列圖譜。
4、基因圖譜基因圖譜是在識別基因組所包含的蛋白質編碼序列的基礎上繪製的結合有關基因序列、位置及表達模式等資訊的圖譜。在人類基因組中鑑別出佔具2%~5%長度的全部基因的位置、結構與功能，最主要的方法是通過基因的表達產物mrna反追到染色體的位置。基因圖譜的意義：
在於它能有效地反應在正常或受控條件中表達的全基因的時空圖。通過這張圖可以瞭解某一基因在不同時間不同組織、不同水平的表達；也可以瞭解一種組織中不同時間、不同基因中不同水平的表達，還可以瞭解某一特定時間、不同組織中的不同基因不同水平的表達。
全基因組測序的內容,全基因組測序的意義是什麼？
1998年，克萊格 凡特的塞雷拉基因組公司成立，而且宣佈將在2001年完成定序工作。隨後國際團隊也將完成工作的期限提前。2000年6月26日，塞雷拉公司的代表凡特，以及國際合作團隊的代表弗朗西斯 柯林斯 francis collins 在美國 柯林頓的陪同下發表演說，宣佈人類基因組的概要已經完成。2...
全轉錄組測序可以選近緣物種作為參考基因組嗎
轉錄組測序前,需要對物種轉錄組的大小進行評估,評估方法如下 對於有參考基因組回的物種,答可以分析基因組資訊,統計編碼基因的個數,及其鹼基數,從而估計物種轉錄組的大小,另外可以查詢相關或相近物種轉錄組研究的文獻,作為參考。對於無參考基因組的物種則只能參考相近物種的轉錄組大小。轉錄組測序所需的測序量隨研...
全基因組測序可以檢測出平衡易位嗎
平衡易位用核型分析就可以檢測了，目前的基因晶片技術還不能檢測平衡易位。人家問得是全基因組測序你們說晶片幹啥？全基因組測序通過特別的策略可以分辨平衡易位，但是成功率低，不穩定，還在科研沒有用於臨床。全基因測序檢測檢測不出平衡移位，全基因測序只能得到一大批無用的資料。這些資料有什麼用，需要基因解碼，這個...