高效液相色譜分析法中為什麼採用梯度淋洗

2021-03-19 18:20:13 字數 2921 閱讀 1166

1樓:千葉雅之

梯度淋洗,就是程式洗脫,簡稱就是梯度。

主要就是變化流動相比例。主要目

的就是為了分離樣品,其次還有減短分析時間,改善峰型,提高靈敏度等等。

比如這個梯度,流動相a是磷酸鹽水相,b是乙腈保留時間(min)  乙腈(%)

0                            1020                          3030                          3032                          1040                          10相當於這種狀態

就是從0-20min這段時間,逐步往裡面加入乙腈,這樣的話有助於極性相似的物質分離。如果是裡面有一個極性比較小的物質,那麼乙腈量增大,這個物質出峰時間就會提前。減短了分析時間。

高效液相色譜分析法中為什麼要採用梯度淋洗

2樓:匿名使用者

當被分離組分較複雜時,等梯度洗脫難以將組分很好的分離並完全洗脫,就得考慮梯度洗脫了。液相色譜的梯度洗脫作用類似於氣相色譜的程式升溫,總之,為了達到更好的分離效果。

高效液相色譜分析法中為什麼要採用梯度淋洗

3樓:匿名使用者

色譜法(chromatography)又稱色譜分析、色譜分析法、層析法,是一種分離和分析方法,在分析化學、有機化學、生物化學等領域有著非常廣泛的應用。色譜法利用不同物質在不同相態的選擇性分配,以流動相對固定相中的混合物進行洗脫,混合物中不同的物質會以不同的速度沿固定相移動,最終達到分離的效果。

1、色譜的起源

色譜法起源於20世紀初,2023年**植物學家米哈伊爾•茨維特用碳酸鈣填充豎立的玻璃管,以石油醚洗脫植物色素的提取液,經過一段時間洗脫之後,植物色素在碳酸鈣柱中實現分離,由一條色帶分散為數條平行的色帶。由於這一實驗將混合的植物色素分離為不同的色帶,因此茨維特將這種方法命名為chromatography,這個單詞最終被英語等拼音語言接受,成為色譜法的名稱。漢語中的色譜也是對這個單詞的意譯。

色譜法茨維特並非著名科學家,他對色譜的研究以俄語發表在**的學術雜誌之後不久,第一次世界大戰爆發,歐洲正常的學術交流被迫終止。這些因素使得色譜法問世後十餘年間不為學術界所知,直到2023年德國柏林威廉皇帝研究所的庫恩將茨維特的方法應用於葉紅素和葉黃素的研究,庫恩的研究獲得了廣泛的承認,也讓科學界接受了色譜法,此後的一段時間內,以氧化鋁為固定相的色譜法在有色物質的分離中取得了廣泛的應用,這就是今天的吸附色譜。

高效液相色譜分析法中為什麼要採用梯度淋洗

4樓:匿名使用者

因為物質性質差別大,用單一濃度不能分離所有雜質;或時間太長,後面的峰就會變形

高效液相色譜分析法中為什麼要採用梯度淋洗

5樓:深水◇靜流

梯度洗脫(gradient elution)又稱為梯度淋洗或程式洗提。

在氣相色譜中,為了改善對寬沸程樣品的分離和縮分析間週期,廣泛採用程式升溫的方法。而在液相色譜中則採用梯度洗脫的方法。在同一個分析週期中,按一定程度不斷改變流動相的濃度配比,稱為梯度洗脫。

從而可以使一個複雜樣品中的性質差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達到良好的分離目的。

梯度洗脫的優點:1.縮短分析週期;2.提高分離能力;3.峰型得到改善,很少拖尾;4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。

梯度洗脫的原理: 流動相由幾種不同極性的溶劑組成,通過改變流動相中各溶劑組成的比例改變流動相的極性,使每個流出的組分都有合適的容量因子k',並使樣品種的所有組分可在最短時間內實現最佳分離。

梯度洗脫特點: 提高柱效改善檢測器的靈敏度當樣品中的一個峰的k'值和最後一個峰的k'值相差幾十倍至幾百倍時,使用梯度洗脫效果特別好。梯度洗脫中為保證流速的穩定,必須使用恆流泵,否則難獲重複結果。

6樓:匿名使用者

朋友,為了節省分析時間

高效液相色譜為什麼要進行purge工作?

7樓:匿名使用者

這個不是絕對的。因為在液相色譜工作的時候,進入氣泡是特別麻煩的事,尤其是進入檢測器裡,有時很難弄出去。而進氣泡最容易的地方就是流動相那個過濾頭,幾乎99%的情況的氣泡都是從那進去的,所以通過泵進入柱子前的時候,加了一個purge閥,如果有氣泡的話,可以直接排出去了,還有就是有時更換系統的時候,由於如果有色譜柱的時候壓力過大,柱子不能承受,所以只能用1-2ml/min的流速來沖洗系統,但如果開啟purge閥的話,那流速就可以設定為2-3甚至是5ml/min,那樣的話,轉換系統的速度就非常快了,節約了 大量的時間。

在高效液相色譜中梯度洗脫裝置的作用是什麼

8樓:匿名使用者

梯度洗脫裝置分兩種:

高壓梯度:用兩臺高壓輸液泵將兩種溶劑輸入

低壓梯度:在常壓下將兩種溶劑(或多元溶劑)混合,然後用高壓輸液泵將流動相輸入到色譜柱中。

梯度洗脫可提高分離度、縮短分離時間、降低最小檢測量和提高分離精度。

但在使用中,梯度洗脫也有許多與等度洗脫不同的地方需要注意。

梯度洗脫時應注意:

1、注意各溶劑間的互溶性。

2、對溶劑的純度要求更高(影響重現性)。

3、注意梯度變化時系統壓力的變化,防止超出限度。

4、梯度結束後,用初始流動相沖洗,使柱子平衡一段時間(再生),使系統回覆到初始狀態。(梯度週期)

5、低壓梯度要注意脫氣,混合後容易產生氣泡。

6、容易出現鬼峰,應作空白試驗。

7、梯度選擇時儘量幾相之間相變化要小,否則不易平衡。

8、梯度洗脫應使用對流動相組成變化不敏感的選擇性檢測器(如紫外吸收檢測器或熒光檢測器),而不能使用對流動相組成變化敏感的通用型檢測器(如示差折光檢測器)。

9、要注意水相中鹽的濃度,防止在有機相提升過程中鹽的析出。

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