1樓：匿名使用者
通常情況下
ph對液相色譜色譜分離的影響主要決定於待分離的組分對ph的敏感度，換句話說就是待分離的組分極性的大小，當待分離的組分極性較大，比如有機弱酸或有機弱鹼等，ph不同會影響有機酸鹼的存在型體，當大量離子型組分存在時，會改變待分離組分的分配係數，從而改變分離度。
極端情況下
ph過高或過低會導致矽膠表面性質，所以現在的液相色譜柱有使用的ph範圍，當ph不合適的情況下，會導致色譜柱的損壞，進而導致分離情況發生變化。
所以如果ph不超過色譜柱的容忍範圍，ph的影響主要決定於待分離組分的極性大小。
2樓：仝靚田華皓
是指緩衝液的ph。加了有機相對ph影響不大，在柱子的耐受範圍內就行，樓主不必擔心。但是下次不要再做錯了。
高效液相色譜儀的分離度為什麼要大於1.5
3樓：匿名使用者
相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值.也叫解析度,表示相鄰兩峰的分離程度.r越大,表明相鄰兩組分分離越好.
1、一般說當r＜1時,兩峰有部分重疊；當r=1.0時,分離度可達98%
2、當r=1.5時,稱為6σ分離,裸露峰面積為99.7%.
r≥1.5稱為完全分離.《中國藥典》規定r應大於1.
5.通常用r=1.5作為相鄰兩組分已完全分離的標誌.
3、當r＝1時,稱為4σ分離,兩峰基本分離,裸露峰面積為95.4%,內側峰基重疊約2%
分離度計算公式：r=2(tr2-tr1)/(w1+w2)
所以當兩峰分離程度達99.7%時,分享儀式至少應=1.5.
4樓：匿名使用者
分離度達到1.5可以認為兩個成分完全分離，不會互相干擾
哪些原因會導致液相色譜峰分離度差，峰分不開
5樓：j奇蹟
很多因素，如：柱效，柱子的型別、流速、壓力、流動相的種類、柱溫、緩衝鹽和溶劑的ph等等，可以先從簡單的開始逐個的排查。
高效液相色譜分離度不好該怎樣處理?
6樓：匿名使用者
1、減少有機相比例（反相色譜，正相色譜增大有機相比例），流速不會影響分離度
2、更換色譜柱
3、關掉柱溫箱，增大柱溫只能減小分離度
4，減小進樣量
7樓：鵂鶹
1、流動相選擇配比調整一下。
2、如果有柱溫箱的話，用柱溫箱加熱試試。
3、以前分離的好不好，如果好現在不好，色譜柱問題比較大，換根色譜柱！
8樓：匿名使用者
最好看看買的hplc是否效能可靠。
9樓：匿名使用者
1.調整流動相的比例或者成分
2.適當的降低流速或者降低柱溫
3.換跟廠家的柱子試試，不同廠家的柱子效能差很多的
高效液相色譜如何計算分離度
10樓：溯風
不是很明白樓主的意思，你的意思是進了5針嗎？每個都給出保留時間還是一張圖上有5個峰呢？
分離度是計算臨近2峰的，單個峰是沒有辦法說分沒分開的問題的。
如果是5張圖上的話，每張圖都要算對照和臨近峰之間的分離度，而且儘量重複性高。要是是一張圖上的5個峰的話就要算對照品臨近兩峰之間的分離度了。
一般的液相色譜工作站都會自動給出，你可以向以前做過的人諮詢一下應該怎麼設定。
分離度又稱解析度,為了判斷分離物質對色譜柱在色譜柱中的分離情況,常用分離度作為柱的總分離效能指標.用r表示.r等於相鄰色譜峰保留時間之差與兩色譜峰峰寬均值之比.
resolution，r 相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫解析度，表示相鄰兩峰的分離程度。r越大，表明相鄰兩組分分離越好。
一般說當r＜1時，兩峰有部分重疊；當r=1.0時，分離度可達98%；當r=1.5時，分離度可達99.
7%。通常用r=1.5作為相鄰兩組分已完全分離的標誌。
當r＝1時，稱為4σ分離，兩峰基本分離，裸露峰面積為95.4%，內側峰基重疊約2%。r＝1.
5時，稱為6σ分離，裸露峰面積為99.7%。r≥1.
5稱為完全分離。《中國藥典》規定r應大於1.5。
分離度計算公式：r=2(tr2-tr1)/(w1+w2)
11樓：匿名使用者
分離度是對於兩個相臨峰來說的，分離度r=保留時間的差值/半峰寬之和，只要保證相鄰峰分離度r>1.5就行，一般要求2最好。不相鄰的峰之間的分離度就毫無意義了，引起分離度r必然》1.
5。其實一般的工作站都能給出分離度的。可以自己試試看。
12樓：匿名使用者
你用的什麼軟體，軟體上有個k'的就是分離度，一般不自己計算，你把那個新增上，軟體有計算。
高效液相色譜中怎樣改善條件達到分離度要求
13樓：禾鳥
（1）選擇合適的流動相，使其流經色譜柱時，受到的阻力減小，從而能迅速通過色譜柱，且必須對載液加高壓。
（2）可選擇合適的固定相和流動相以達到最佳分離效果。高效液相色的分離效果比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
（3）定時清洗柱子。高效液相色譜的柱子可反覆使用：用一根柱子可分離不同化合物。但是要定時清洗柱子從而分離度。
擴充套件資料
高效液相色譜法的特點：
高效液相色譜法有「四高一廣」的特點：
（1）高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。
（2）高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內即可完成，一般小於1小時。
（3）高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。
（4）高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μl數量級。
（5）應用範圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。
（6）柱子可反覆使用：用一根柱子可分離不同化合物
（7）樣品量少、容易**：樣品經過色譜柱後不被破壞，可以收集單一組分或做製備。
14樓：匿名使用者
要改善的條件很多，介紹幾種供參考
1、色譜柱，色譜柱使用時間長了，柱效會降低，會影響到分離度的，改善方法是更換新的色譜柱。如果已經是新的色譜柱了，分離度還不好，那可以採用更長一些的色譜柱，也會增加分離度。
2、流動相的調節，通過調節流動相中各組分的比例，使流動相的極性發生變化，分離效率會不一樣，這要針對要檢測的成分具體情況進行分析確定。
3、改變柱溫，相同條件下升高柱溫，會增大色譜柱的分離能力而提高分離度。
15樓：匿名使用者
液相色譜改善分離度的一般是：色譜柱、流動相、柱溫、流速等方面。
建議你去「色譜世界」**看看，這個**在色譜方面非常專業，高手較多，應該能幫到你的。
16樓：手機使用者
改變流動相或改變流速
17樓：魚暘
1、減小固定相顆粒直徑（3-10um）
2、降低流動相粘度或提高柱溫
3、一定範圍內減小流速（多用1ml/min）4、提高裝柱技術（常採用勻漿法）
5、減小柱外死體積（減少樣品在此部分的擴散）
液相色譜進樣品不出峰的原因有哪些
一般就是幾個原因導致的 儀器 方法，或者是操作。1 儀器 你先看看專儀器的而壓屬力是多少。是不是 漏液了。如果漏了肯定是檢不出來了。再有就是放大看一看基線噪音，查一下氘燈的使用時間。2 方法 波長，這個是直接原因，你這個物質測過紫外嗎？在這個波長下有沒有吸收呢？如果波長錯了，那你就別費勁了。溶劑，你...
高效液相色譜梯度淋洗中溶劑極性順序如何？
無論是等度還是梯度，都不影響正反向啊！看你的色譜柱選擇是正相 如氰基柱 還是反相 如c18 你的問題不是很清楚，選擇梯度一般在分離極性相差很大的物質，一般是前段用大極性，再逐步加大有機相比例。環已烷 正已烷 甲苯 2.4 二甲苯 苯 二氯甲烷 3.1 異丙醇 正丁醇 四氫呋喃 4.0 氯仿 乙醇 乙...
高效液相色譜相同條件下峰形相差很多是什麼原因
1.流通池被嚴重汙染，清洗流通池 2.氘燈老化，能量低，更換氘燈 3.進樣系統出現問題，樣沒進到柱子裡 4.系統漏液。高效液相色譜法分離某物質得到的色譜圖兩個峰值相同，是什麼原因？應該採用哪些具體措施改善其分離呢？先看看峰寬，出峰很快的峰寬一定會很窄，反之最有可能的是你的柱子壞了或者回填料不合適。確...