1樓：浦恐
鹼提法：
一、試劑準備
1. 溶液ⅰ: 50mm葡萄糖，25mm tris-hcl(ph 8.
0)，10mm edta(ph 8.0）。1m tris-hcl(ph 8.
0）12.5ml，0.5m edta（ph 8.
0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddh2o至500ml。在10 lbf/in2高壓滅菌15min ，貯存於4℃。
2. 溶液ⅱ：0.2n naoh，1% sds。2n naoh 1ml，10%sds 1ml，加ddh2o至10ml。使用前臨時配置。
3. 溶液ⅲ：醋酸鉀（kac）緩衝液，ph 4.8。5m kac 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddh2o至500ml。4℃儲存備用。
4. te：10mm tris-hcl(ph 8.
0)，1mm edta(ph 8.0)。1m tris-hcl（ph 8.
0）1ml，0.5m edta（ph 8.0）0.
2ml，加ddh2o至100ml。15 lbf/in2高壓溼熱滅菌20min，4℃儲存備用。
5.苯酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）
6.乙醇（無水乙醇、70%乙醇）
7. 5×tbe：tris 鹼54g，硼酸27.
5g，edta-na2·2h2o 4.65g，加ddh2o 至1000ml。15 lbf/in2高壓溼熱滅菌20min，4℃儲存備用。
8．溴化乙錠（eb）：10mg/ml
9.rnase a（rna酶a）：不含dna酶(dnase-free) rnase a的10mg/ml，te配製，沸水加熱15min，分裝後貯存於-20℃。
10. 6×loading buffer（上樣緩衝液）：0.25%溴酚藍，0.25%二甲苯青ff，40%（w/v）蔗糖水溶液。
11. 1% 瓊脂糖凝膠：稱取1g瓊脂糖於三角燒瓶中，加100ml 0.
5×tbe，微波爐加熱至完全溶化，冷卻至60℃左右，加eb母液（10mg/ml）至終濃度0.5μg/ml（注意：eb為強誘變劑，操作時帶手套），輕輕搖勻。
緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩衝液0.5×tbe），即可上樣。
二、操作步驟
1. 挑取lb固體培養基上生長的單菌落，接種於2.0ml lb（含相應抗生素）液體培養基中，37℃、250g振盪培養過夜（約12-14hr）。
2.取1.5ml培養物入微量離心管中，室溫離心8000g×1min，棄上清，將離心管倒置，使液體儘可能流盡。
3.將細菌沉澱重懸於100μl預冷的溶液ⅰ中，劇烈振盪，使菌體分散混勻。
4.加200μl新鮮配製的溶液ⅱ，顛倒數次混勻（不要劇烈振盪），並將離心管放置於冰上2-3min，使細胞膜裂解（溶液ⅱ為裂解液，故離心管中菌液逐漸變清）。
5.加入150μl預冷的溶液ⅲ，將管溫和顛倒數次混勻，見白色絮狀沉澱，可在冰上放置3-5min。溶液ⅲ為中和溶液，此時質粒dna復性，染色體和蛋白質不可逆變性，形成不可溶複合物，同時k+使sds-蛋白複合物沉澱。
6.加入450μl的苯酚/氯仿/異戊醇，振盪混勻，4℃離心12000g × 10min。
7.小心移出上清於一新微量離心管中，加入2.5倍體積預冷的無水乙醇，混勻，室溫放置2-5min，4℃離心12000g×15min。
8.1ml預冷的70%乙醇洗滌沉澱1-2次，4℃離心8000g×7min，棄上清，將沉澱在室溫下晾乾。
9.沉澱溶於20μl te（含rnase a 20μg/ml），37℃水浴30min以降解rna分子，-20℃儲存備用。
2樓：
拜託ls的，至少要把細胞膜和核膜破開吧！？
買個試劑盒對著說明書操作好了
3樓：
呵呵3樓的是自己配試劑自己做，
如果實驗室比較有錢，
乾脆買個質粒提取試劑盒，
照著說明書做就可以了。
4樓：沼澤鈴蘭
樓上的，一般自己提質粒得率高些，但試劑盒提取質粒純度比較高
怎樣提取微生物的質粒
5樓：翰林學庫
鹼提法：
一、試劑準備
1. 溶液ⅰ: 50mm葡萄糖，25mm tris-hcl(ph 8.
0)，10mm edta(ph 8.0）。1m tris-hcl(ph 8.
0）12.5ml，0.5m edta（ph 8.
0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddh2o至500ml。在10 lbf/in2高壓滅菌15min ，貯存於4℃。
2. 溶液ⅱ：0.2n naoh，1% sds。2n naoh 1ml，10%sds 1ml，加ddh2o至10ml。使用前臨時配置。
3. 溶液ⅲ：醋酸鉀（kac）緩衝液，ph 4.8。5m kac 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddh2o至500ml。4℃儲存備用。
4. te：10mm tris-hcl(ph 8.
0)，1mm edta(ph 8.0)。1m tris-hcl（ph 8.
0）1ml，0.5m edta（ph 8.0）0.
2ml，加ddh2o至100ml。15 lbf/in2高壓溼熱滅菌20min，4℃儲存備用。
5.苯酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）
6.乙醇（無水乙醇、70%乙醇）
7. 5×tbe：tris 鹼54g，硼酸27.
5g，edta-na2·2h2o 4.65g，加ddh2o 至1000ml。15 lbf/in2高壓溼熱滅菌20min，4℃儲存備用。
8．溴化乙錠（eb）：10mg/ml
9.rnase a（rna酶a）：不含dna酶(dnase-free) rnase a的10mg/ml，te配製，沸水加熱15min，分裝後貯存於-20℃。
10. 6×loading buffer（上樣緩衝液）：0.25%溴酚藍，0.25%二甲苯青ff，40%（w/v）蔗糖水溶液。
11. 1% 瓊脂糖凝膠：稱取1g瓊脂糖於三角燒瓶中，加100ml 0.
5×tbe，微波爐加熱至完全溶化，冷卻至60℃左右，加eb母液（10mg/ml）至終濃度0.5μg/ml（注意：eb為強誘變劑，操作時帶手套），輕輕搖勻。
緩緩倒入架有梳子的電泳膠板中，勿使有氣泡，靜置冷卻30min以上，輕輕拔出梳子，放入電泳槽中（電泳緩衝液0.5×tbe），即可上樣。
二、操作步驟
1. 挑取lb固體培養基上生長的單菌落，接種於2.0ml lb（含相應抗生素）液體培養基中
6樓：無名
需要破碎微生物的細胞，提取分離其中的環狀dna，即質粒
請問:微生物的質粒傳遞和丟失問題.
7樓：
質粒是染色體外的另一種遺傳因子。質粒並不是細菌生存和繁殖所必需的，但它們可以在菌株間、菌種間傳遞基因。因此可以在異種之間傳遞。
傳遞的方式主要是接合轉移，接合接合是指細菌通過質粒介導和性菌毛連線溝通的細胞間接觸，將遺傳物質（質粒或染色體）從供體菌轉入受體菌。性菌毛是f質粒表達的中空管狀結構。
轉移進入的質粒在沒有選擇壓力的情況下容易丟失，另外如果轉入的質粒與微生物胞內已有的質粒為同源或者近緣，由於質粒不相容性，也容易產生丟失。
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