反應體系是什麼？有益嗎？

1樓：遊俠

pcr反應體系與反應條件標準的pcr反應體系： 10×擴增緩衝液 10ul 4種dntp混合物各200umol/l 引物各10～100pmol 模板dna taq dna聚合酶 2.

5u mg2+ 加雙或三蒸水至 100ul pcr反應五要素：參加pcr反應的物質主要有五種即引物、酶、dntp、模板和mg2+ 引物：

引物是pcr特異性反應的關鍵，pcr 產物的特異性取決於引物與模板dna互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板dna序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用pcr就可將模板dna在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：

①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度：

以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ③引物鹼基：g+c含量以40-60%為宜，g+c太少擴增效果不佳，g+c過多易出現非特異條帶。

atgc最好隨機分佈，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3''端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。 ⑤引物3''端的鹼基，特別是最末及倒數第二個鹼基，應嚴格要求配對，以避免因末端鹼基不配對而導致pcr失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點，被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點，這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性：引物應與核酸序列資料庫的其它序列無明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度或10～100pmol，以最低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

酶及其濃度目前有兩種taq dna聚合酶**，一種是從棲熱水生桿菌中提純的天然酶，另一種為大腸菌合成的基因工程酶。催化一典型的pcr反應約需酶量指總反應體積為100ul時)，濃度過高可引起非特異性擴增，濃度過低則合成產物量減少。