核酸的變性與復性在生物技術上的應用

2021-03-19 18:19:32 字數 3292 閱讀 7708

1樓:匿名使用者

最重要應用就是pcr技術.核酸加熱到95度後解離後單鏈,然後相應的聚合酶就將鹼基按對應關係加到已成單鏈的dna上(模板).然後再降溫後就出現復性,即單鏈dna複合成雙鏈.

如此反覆迴圈,就可以利用少量模板擴增幾百萬倍的目標dna. pcr技術已成為現代生物學的基礎技術.

2樓:匿名使用者

複製dna,比如用在pcr技術上

核酸變性,復性的影響因素及應用有哪些

3樓:匿名使用者

一、知識要點

核酸分兩大類:dna和rna.所有生物細胞都含有這兩類核酸.但病毒不同,dna病毒只含有dna,rna病毒只含rna.

核酸的基本結構單位是核苷酸.核苷酸由一個含氮鹼基(嘌呤或嘧啶),一個戊糖(核糖或脫氧核糖)和一個或幾個磷酸組成.核酸是一種多聚核苷酸,核苷酸靠磷酸二酯鍵彼此連線在一起.

核酸中還有少量的稀有鹼基.rna中的核苷酸殘基含有核糖,其嘧啶鹼基一般是尿嘧啶和胞嘧啶,而dna中其核苷酸含有2′-脫氧核糖,其嘧啶鹼基一般是胸腺嘧啶和胞嘧啶.在rna和dna中所含的嘌呤基本上都是鳥嘌呤和腺嘌呤.

核苷酸在細胞內有許多重要功能:它們用於合成核酸以攜帶遺傳資訊;它們還是細胞中主要的化學能載體;是許多種酶的輔因子的結構成分,而且有些(如camp、cgmp)還是細胞的第二信使.

dna的空間結構模型是在2023年由watson和crick兩個人提出的.建立dna空間結構模型的依據主要有兩方面:一是由chargaff發現的dna中鹼基的等價性,提示a=t、g≡c間鹼基互補的可能性;二是dna纖維的x-射線衍射分析資料,提示了雙螺旋結構的可能性.

dna是由兩條反向直線型多核苷酸組成的雙螺旋分子.單鏈多核苷酸中兩個核苷酸之間的唯一連鍵是3′,5′-磷酸二酯鍵.按watson-crick模型,dna的結構特點有:

兩條反相平行的多核苷酸鏈圍繞同一中心軸互繞;鹼基位於結構的內側,而親水的糖磷酸主鏈位於螺旋的外側,通過磷酸二酯鍵相連,形成核酸的骨架;鹼基平面與軸垂直,糖環平面則與軸平行.兩條鏈皆為右手螺旋;雙螺旋的直徑為2nm,鹼基堆積距離為0.34nm,兩核酸之間的夾角是36°,每對螺旋由10對鹼基組成;鹼基按a=t,g≡c配對互補,彼此以氫鍵相連繫.

維持dna結構穩定的力量主要是鹼基堆積力;雙螺旋結構表面有兩條螺形凹溝,一大一小.

dna能夠以幾種不同的結構形式存在.從b型dna轉變而來的兩種結構a型和z型結構巳在結晶研究中得到證實.在順序相同的情況下a型螺旋較b型更短,具有稍大的直徑.

dna中的一些特殊順序能引起dna彎曲.帶有同一條鏈自身互補的顛倒重複能形成髮卡或十字架結構,以鏡影排列的多嘧啶序列可以通過分子內摺疊形成三股螺旋,被稱為h -dna的三鏈螺旋結構.由於它存在於基因調控區,因而有重要的生物學意義.

不同型別的rna分子可自身回折形成髮卡、區域性雙螺旋區,形成二級結構,並摺疊產生**結構,rna與蛋白質複合物則是四級結構.trna的二級結構為三葉草形,**結構為倒l形.mrna則是把遺傳資訊從dna轉移到核糖體以進行蛋白質合成的載體.

核酸的糖苷鍵和磷酸二酯鍵可被酸、鹼和酶水解,產生鹼基、核苷、核苷酸和寡核苷酸.酸水解時,糖苷鍵比磷酸酯鍵易於水解;嘌呤鹼的糖苷鍵比嘧啶鹼的糖苷鍵易於水解;嘌呤鹼與脫氧核糖的糖苷鍵最不穩定.rna易被稀鹼水解,產生2』-和3』-核苷酸,dna對鹼比較穩定.

細胞內有各種核酸酶可以分解核酸.其中限制性內切酶是基因工程的重要工具酶.

核酸的鹼基和磷酸基均能解離,因此核酸具有酸鹼性.鹼基雜環中的氮具有結合和釋放質子的能力.核苷和核苷酸的鹼基與遊離鹼基的解離性質相近,它們是兼性離子.

核酸的鹼基具有共軛雙鍵,因而有紫外吸收的性質.各種鹼基、核苷和核苷酸的吸收光譜略有區別.核酸的紫外吸收峰在260nm附近,可用於測定核酸.

根據260nm與280nm的吸收光度(a260)可判斷核酸純度.

變性作用是指核酸雙螺旋結構被破壞,雙鏈解開,但共價鍵並未斷裂.引起變性的因素很多,升高溫度、過酸、過鹼、純水以及加入變性劑等都能造成核酸變性.核酸變性時,物理化學性質將發生改變,表現出增色效應.

熱變性一半時的溫度稱為熔點或變性溫度,以tm來表示.dna的g+c含量影響tm值.由於g≡c比a=t鹼基對更穩定,因此富含g≡c的dna比富含a=t的dna具有更高的熔解溫度.

根據經驗公式xg+c =(tm - 69.3)× 2.44可以由dna的tm值計算g+c含量,或由g+c含量計算tm值.

變性dna在適當條件下可以復性,物化性質得到恢復,具有減色效應.用不同**的dna進行退火,可得到雜交分子.也可以由dna鏈與互補rna鏈得到雜交分子.

雜交的程度依賴於序列同源性.分子雜交是用於研究和分離特殊基因和rna的重要分子生物學技術.

染色體中的dna分子是細胞內最大的大分子.許多較小的dna分子,如病毒dna、質粒dna、線粒體dna和葉綠體na也存在於細胞中.許多dna分子,特別是細菌的染色體dna和線粒體、葉綠體dna是環形的.

病毒和染色體dna有一個共同的特點,就是它們比包裝它們的病毒顆粒和細胞器要長得多,真核細胞所含的dna要比細菌細胞多得多.

真核細胞染色質組織的基本單位是核小體,它由dna和8個組蛋白分子構成的蛋白質核心顆粒組成.其中h2a,h2b,h3,h4各佔兩個分子,有一段dna(約146bp)圍繞著組蛋白核心形成左手性的線圈型超螺旋.細菌染色體也被高度摺疊,壓縮成擬核結構,但它們比真核細胞染色體更富動態和不規則,這反映了原核生物細胞週期短和極活躍的細胞代謝.

簡述核酸的變性,復性與分子雜交

4樓:擼灬自深

....就是高溫或者氫氧化鈉溶液浸泡使dna分子中的氫鍵被破壞,俗稱變性

復性就比較好理解了,退火使氫鍵重新形成,使dna分子變為穩定結構分子雜交貌似就是往載體內匯入目的gene然後再將載體送進受體細胞,然後讓目的gene能夠在受體細胞內穩定遺傳

然後就是用探針進行目的gene的檢測啊什麼什麼的

5樓:張咲帥

核酸的變性是指受理化因素影響,維持核酸三維結構的鹼基堆積力和氫鍵被破壞,其三維結構改變,理化性質及生物學功能變化的現象。

核酸的復性是指在適宜條件下,熱變性後的兩條核酸單鏈可重新締合恢復雙螺旋結構的過程;熱變性後的核酸經緩慢冷卻的過程又稱為退火。

分子雜交是指不完全互補的兩條多核苷酸鏈,依據鹼基配對的原則,部分相互結合的現象。

何謂核酸的變性,復性,雜交?各受哪些因素的影響

6樓:

變性,這是dna最重要的一個性質.

①dna雙鏈之間以氫鍵連線,氫鍵是一種次級鍵,能量較低,易受破壞,在某些理化因素作用下,dna分子互補鹼基對之間的氫鍵斷裂,使dna雙螺旋結構鬆散,變成單鏈,即為dna變性.dna變性只涉及二級結構改變,不伴隨一級共價鍵的斷裂

簡述核酸的變性,復性與分子雜交,何謂核酸的變性,復性,雜交?各受哪些因素的影響

就是高溫或者氫氧化鈉溶液浸泡使dna分子中的氫鍵被破壞,俗稱變性 復性就比較好理解了,退火使氫鍵重新形成,使dna分子變為穩定結構分子雜交貌似就是往載體內匯入目的gene然後再將載體送進受體細胞,然後讓目的gene能夠在受體細胞內穩定遺傳 然後就是用探針進行目的gene的檢測啊什麼什麼的 核酸的變性...

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