RNA的提取中為什麼要先加異丙醇再加乙醇?

2025-06-05 15:50:12 字數 3025 閱讀 3306

1樓:水源源源水流源

異丙醇是可以沉澱dna的。後續或者前面應該有分離掉dna的方法,因為dna假如你是真核的話,通常是染色體的形式出現,分子量很大的,很容易沉澱下來,但是rna的分子量就比較小,從而產生分離。

異丙醇可以沉澱rna和蛋白質,其實。。。假如很本質的看,都是差不多的,就是搶水。但是其還會讓蛋白質變性,rna什麼的,不會,假如你不是研究什麼二級結構的話。

異丙醇的作用是通過-oh的疏水作用使得rna 或者dna鏈中的親水基團受到保護,等同於沉澱,但是這是個反應時發生在水相中,氯仿的作用有多個方面,一是作為有機溶劑變性蛋白,使其沉澱並通過離心除去,同時也通過變性作用抑制rnase活性;二是rna提取試劑中通常含有苯酚(trizol主要成分就是苯酚,很多自己配試劑提的方法也用苯酚,抽提蛋白時也會用到苯酚),苯酚微溶於水,抽提烷之後水相里有痕量的酚,如果不除去會損傷核酸,需要通過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉;三是作為溶劑抽提樣品中的一些脂溶性雜質(比如油脂、脂溶性色素虛州等),起到一定除雜作用。

通常氯仿裡面會加差虛蔽少量異戊醇(1/25),減少蛋白質在變性過程中由於**產生的譽歲泡沫,影響後續操作,不過個人經驗感覺加不加沒什麼太大區別,也許是我的樣品裡蛋白不多吧。

異丙醇是沉澱核酸用的,作用和乙醇一樣。只不過用量少一點,就夠了,不像乙醇沉澱需要至少2v,一般需要倍體積。在水相很多,離心管容積有限,加不下太多乙醇的時候一般會用異丙醇沉澱。

不過感覺效果不如乙醇,偶爾會有沉澱不出來東西的時候。

2樓:汐

抽rna如果希望得率高,可以先加入nacl或醋酸銨,再加異丙醇,-20度醇沉過夜。第二天離心去上清,用乙醇洗兩遍。

下面說原理:

1.把溶液調成高鹽:

鹽離子和rna搶水,破壞rna的水化層,導致rna和水的親和力降低,方便醇沉。

如果你的rna少,醇沉不出來,推薦加鹽。

有次體外轉錄rna,橋手野手邊rnase free的高鹽溶液用完了,省了這步,就沒醇沉出rna。第二天重做,加了鹽,rna就出來了。

2.先用異丙醇醇沉:

異丙薯派醇和rna搶水,破壞rna的水化層,導致rna析出沉降。 異丙醇羥基多,搶水能力大於乙醇,醇沉效果更好。

但是,異丙醇揮發性遠遠低於敏喊乙醇,很難晾乾。

3.後用乙醇洗兩遍:

乙醇可以帶走高鹽留下來的鹽離子,帶走揮發不乾淨的異丙醇,帶走醇沉時同樣析出的蛋白質和脂類。 乙醇揮發快,很快就能幹,是異丙醇比不了的優點。

具體步驟,可參考neb e2050說明書的rna純化。

3樓:喻水卉

異丙醇。的沉澱能力比乙醇強,能夠從混合物中把較低濃度肆兄的核酸沉澱下來。但是,非脂溶性的裂源襲雜質也會被異丙醇沉澱下來,這時候就要用70%的乙醇(含30%的水)來洗掉一部分雜質。

由於異丙醇已經富集了核酸,所以乙醇沉澱起來也更加容易。最後,乙醇比異丙醇要容易乾燥得多。當然,跳過異丙醇直接用乙醇也是可以的,但就要沉澱比較久裂春了。

前面提取的rna經異丙醇沉澱後,總會含有一些未除去的蛋白和其它雜質分子,這些蛋白和雜質分子如果不除盡的話,就會直接影響所提取的rna的純度和穩定性。為此,就需要用70%乙醇洗滌沉澱(因為在70%乙醇裡rna是不溶的,而一些蛋白和其它雜質分子卻可溶),並且最好是洗滌2次,然後高速離心後,倒去上清,即可得到較純的rna沉澱。用無水乙醇。

則達不到這個目的。

提取rna 過程中,乙醇沒有除乾淨,對後續試驗有沒有影響,有沒有什麼補救措施

4樓:刺任芹

如果提取血液裡面的小rna那沒有條帶是正常的,因為小rna沒有結合eb的結構,所以電泳看不到什麼東西。其次,如果提取細胞總rna的話,但不排除eb有問題,儀器是可以分辨rna降解的。

在勻質化或溶解樣品中,trizol試劑可保持rna的完整性,同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿。

離心後,裂解液分層成水相和有機相。rna存在於水相中。

水相轉移後,rna通過異丙醇。

沉澱**。移去水相後,用乙醇。

可從中間相沉澱得到dna,加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。

rna提取中加入氯仿和異丙醇的原因

5樓:刺任芹

作為有機溶劑變性蛋白,使其沉澱並通過離心除去,同時也通過變性作用抑制rnase活性。rna提取試劑中通常含有苯酚,苯酚微溶於水,抽提烷之後水相里有痕量的酚,如果不除去會損傷核酸,需要通過氯仿把水相里參與的苯酚抽提掉。

rna是以dna的一條鏈為模板,以鹼基互補配對原則,轉錄而形成的一條單鏈,主要功能是實現遺傳資訊在蛋白質上的表達,是遺傳資訊向表型轉化過程中的橋樑。

rna溶於乙醇嗎

6樓:胡老師談科技

弊局 在做dna提取的時候,用冰租悔讓冷的95%的乙醇溶解rna,得到絲狀dna。

dna不溶於乙醇,實驗中常常用乙醇來沉澱dna。

實驗步驟:加入1/10體積的naac和2ul糖前改原-80℃或-20℃放置1小時,然後於低溫離心機4℃離心,倒掉乙醇(注意不要倒掉沉澱),然後加入500ul75%乙醇溶液洗滌沉澱,低溫離心,然後將乙醇溶液吸乾並晾乾,接著就可以用depc水或rnasefree水溶解沉澱即可。

色譜純異丙醇可以用來提rna嗎對嗎

7樓:

摘要。異丙醇可以用作rna提取的溶劑,但要求使用的異丙醇純度較高,一般要達到色譜純級別。提取rna時一般採用異丙醇、酚/氯仿、三氯乙酸鹽酸鹽等多種試劑,使用異丙醇可能有一定的優勢,如去除rna中的某些汙染物、增加rna提取量等。

但需注意異丙醇在?條件下會發生水解反應,因此使用時需避免水分的進入,同時異丙醇的危險性較大,需注意安全操作。

您能補充下嗎,我有點不太理解。

異丙醇可以用作rna提取的溶劑,但要求使用的異丙醇純度較高,一般要達攜腔散到色譜純級別。提取rna時一般採用異丙醇、酚辯氏/氯仿、三氯乙酸鹽酸鹽等多種試劑,使用異丙醇可能有一定的優勢,如去除rna中的某些汙染物、增加rna提取量等。但需注意異丙醇在?

條件下會發生水解反應,因此使用時需避免水分的進入,同圓茄時異丙醇的危險性較大,需注意安全操作。

為什麼在檢驗氯離子時要先加稀硝酸還是先加硝酸銀

先加硝酸。一般都是說硝酸酸化,再滴加硝酸銀。因為先滴加硝酸銀,很多物質都能沉澱銀離子,可能會造成記憶干擾,你就沒記住,到底是有氯離子呢,還是沒有。希望對你有幫助o o 先加硝酸銀,產生白色沉澱,再加稀硝酸。因為能與硝酸銀產生白色沉澱的不僅僅只有氯離子。先加稀硝酸 避免其他物質的影響 然後加硝酸銀 檢...

I d be glad to中為什麼要加「beglad不是動詞嗎

glad是形容詞才對,這句話的意思是 我很樂意去 所以前面要加 be glad不是動詞,是形容詞,加be,構成系表結構,這是一個 句型 be adj.to do sth.這裡 就是 我很樂意去做 某事 希望 你能明白 i d 是i would 的縮寫,這裡的be glad to do sth是固定搭...

從零開始的異世界生活》中粉絲為什麼要黑“菜月昴

我感覺很多人討厭菜月昴,應該是從王選篇開始,在王選篇那裡一般人表現的也會比他妥當些,但這是他性格的原因,所以也沒什麼錯。但他的性格里有更好的地方,比如為了村子和雷姆她們拼命,比如去救每一個人,比如為艾米利亞堅持不懈。他身上的很多一般人都遠遠做不到,總的來說,菜月昴是個很好很好的人。我很喜歡他,王選時...